作者shiningspark (阿冠)
看板Biotech
标题[方法] Bacterial artificial chromosome (BAC)
时间Mon Feb 2 20:56:40 2015
请教各位，
最近可能需要用 BAC 来 clone 100 kb 左右的 genome，
现在手边只有 DH5alpha 跟 TOP10F' 这两支菌，
各位用过这两支菌做 electroporation 吗?
100 kb 左右的 plasmid 电进去的效率高吗?
查到 DH5alpha 做 electroporation 好像 plasmid size 上限也只能到 10 kb 左右，
一般建议是用另外一只 DH10B，比较会吃大 size 的 plasmid。
但手边的 TOP10 好像跟 DH10B 基因型很相像，
如果 TOP10 就可以用的话，也能省下一笔钱跟时间。
另外，对这两支菌来说，电压一般都使用 1800 V 左右吗?
希望有经验的前辈们给点意见罗，
谢谢！ orz
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※ 编辑: shiningspark (220.135.246.236), 02/02/2015 21:54:53
1F：推 ljii: 标准是作DH10B没错, TOP10也可以, 我都用过, 都没问题 02/03 10:28
2F：→ ljii: 我的BAC 150-200kb都有 02/03 10:28
3F：→ ljii: 不过我还不晓得DH5a 吃不下10kb, 因为我试过是可以的, 我的 02/03 10:29
4F：→ ljii: construct 30kb, 存在DH5a, 之後再prep也没问题 02/03 10:29
5F：→ ljii: 我想只是效率问题吧, 而效率问题根本没差, 成功有一个clone 02/03 10:30
6F：→ ljii: 吃进去, 就可以作stock, 无限放大了 02/03 10:30
7F：→ shiningspark: 谢谢罗, 可能看到 heat shock 的资料才是 10kb 吧 02/03 12:12
8F：→ shiningspark: 没错, 总之想办法把效率提高就是了 02/03 12:18