大家好 小弟有protoplasts染细胞核的问题想请问一下 我目前是采用BiFC 方法看protein和protein间的interaction 用Leica confocal microscopy 观察 目前遇到的问题是 不管是用Hochest 33342(10mg/ml in ddH2O) 或是DAPI (2mg/ml) 似乎都染不进细胞核 我是取1ul Hochest or DAPI + 9ul的protoplasts sample,放到玻片上30分後观察 可是有染到的细胞很少,而且有染到核的却看不到YFP萤光(positive control) (简单说,有发YFP萤光的细胞染不到核,可我就是要有萤光的 ORZ) 我下plasmid的总量20ug,而我也试过不加plasmid,但一样染不进核中 也想过换不同浓度,但只是背景提高亮度or 变暗而已 想请问有经验的大大们,问题出在哪里呢? 我有想过会不会是细胞太健康所以很难进核? 还是plasmid下的量太多排挤到染剂? (我的plasmid表现在核中) 谢谢~ (p.s.这方式我是照以前的学长留下来做的,但到我手上不知道为什麽会染不出, 问过以前的学长姐说方式也没问题,so....) --

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