不好意思因为资讯太少，我想问一些问题便於判断 : : 如果是失败的会保留原长度约为1.1KB， 　请问想去除的片段长度多大？ : 是对genomic DNA上的目标基因利用一段具有抗生素抗性基因做取代。 请问是甚麽抗生素基因？使用的互换机制是？ 　（抗生素基因是带在质体上？或着你送入的是线状DNA？） 然後你应该是使用在抗生素盘上长出来的菌落去抽DNA、做後续PCR吧？　 : 是不是要再另外购买什麽或是连络厂商才能打开机器的权限? 　我觉得不像是PCR或抽DNA的问题， 　因为你的control反应很专一，这种PCR你沾一点菌落或菌液直接当模板都做得出来 　 　所以你没夹出来，我觉得比较可能是 　1. 那些长出来的菌落是污染的杂菌，没有你primer可认得的序列 　　 （如果你提供详细实验流程跟结果： 　　 像是怎麽送入DNA？涂盘後生长菌落数？会比较好判断）　　 　2. 那些菌落都是insertion mutants，然後你primer座落的位置被互换掉了 　　 （这得看primer座落位置跟整个互换的设计）　 　3. 那些菌落都是insertion mutants，primer也没错， 　　 但PCR反应没有强到可以夹出2 KB大小，所以你可以： (1) 将annealing降到50，没出来再降到45，再没出来就放弃 (2) 换别的厂牌的taq，直接测试50跟45度annealing (3) 重新设计其他primer 　　 　　 我想你可以先测试上述的PCR条件， 　　 希望你annealing温度一降就夹出来，问题解决~ 祝实验顺利 --

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