作者pent (有人试我的密码，干)
看板Biotech
标题[求救] 冷冻切片-brain会浮起来
时间Mon Mar 2 22:57:45 2015
brain tissue 打tracing 进去，做circuit 追踪
PBS perfusion 20ml, 4% PFA 10-15ml吧，再浸泡4% PFA 4小时内
换成30% sucrose直到它沈下来。
做成冷冻块，切20um
贴在有silane coating的slide上 (买的)
之後再wet chamber 先用PBS wash, 4% PFA再固定
但是通常到PBS wash这一步，就会有点飘起来的感觉，
到PFA後，有时候就整个浮起来了
我的问题是：
1.再切片时，刚切下来的冷冻slice，是把再室温下的slide
直接黏上slice嘛？
看前人的问题，有提到要向再做paraffin section 一样，
像在水里把石蜡切片贴上去那样的去贴冷冻贴片。
但是，我完全想不出来这要怎麽做？
我是慢慢的，就像slide从垂直於桌面，到45度，然後啪的一声，贴上slice的台子
然後slice就会黏上slide，但是有时候会有泡泡在组织和slide之间，
该怎办？
2. 为啥会浮起来？我发现切10um有好一点，比较不会浮，
但是要tracing，每一片都切10um， 片数会很惊人......
有些贴片和slide顶多只有一、两个小泡，他还是浮起来...orz
Thanks
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1F：→ short945: Brain本来就不容易黏，再加上很厚。如果有某些原因必须 03/03 00:40
2F：→ short945: 要用冷冻切片的方法，那就要找更高级一点的玻片 03/03 00:41
3F：→ short945: 例如superfrost-plus-gold-slides 03/03 00:42
4F：推 hchung: 我之前的作法是在玻片上用毛笔抹上一点点水，像画水彩一样 03/03 15:18
5F：→ hchung: 再把切片贴上去，就会很平。试试看吧~玻片是自制的gelatin 03/03 15:19
6F：→ hchung: coating 03/03 15:19