作者soddaaa (嗄)
看板Biotech
标题[求救] 请问用trypsin是否合适将贴附的PBMC分离
时间Tue Mar 3 18:11:55 2015
为了要将PBMC从Corning plastic well打下来
以进行後续的RNA抽取步骤(使用Roche RNA purification kit)
PBMC贴附後1天便加入trypsin(有warm到37度)
但等了5min後细胞还是有一半都还贴附在盘子上
会不会是因为我的细胞数量太多的关系而trypsin的量不够？
(我的PBMC量为1X107在6cm dish trypsin加0.5ml)
另外由於PBMC型态的关系
很难分辨到底是detach的圆圆小细胞还是原本就是圆圆但是是贴附的PBMC
新手发问
谢谢各位 <_ _>
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1F：推 jabari: 你只是要抽RNA的话.. 用刮刀刮一刮加RNALater直接收了 03/03 18:26
2F：→ soddaaa: 主要是所使用的RNA isolation kit的关系...之後步骤是加l 03/03 19:06
3F：→ soddaaa: lysis buffer+PBS所以会需要先将细胞打下来 03/03 19:07
4F：推 scherzoinb: 我的做法是︰把培养液吸乾，加PBS洗一下细胞，吸乾 03/03 19:59
5F：→ scherzoinb: 再加一些PBS，用刮刀把细胞刮下来，收在eppendroff， 03/03 20:00
6F：→ scherzoinb: 再加lysis buffer+PBS 到kit说明书上的量~~~ 03/03 20:01
7F：→ scherzoinb: 然後就开始跑流程~~~ 03/03 20:03
8F：→ soddaaa: 喔喔谢谢！这样的作法是因为PBMC很难用trypsin打下来吗？ 03/03 20:53
9F：推 michealking: 刮刀+1 另外您的trypsin 浓度多少？ 通常细胞说明书 03/06 06:54
10F：→ michealking: 会有建议浓度 03/06 06:54
11F：推 nprotei: PBMC照理说不会那麽贴? 要不要用用看没coating的plate 03/13 12:30