作者jaren229 (jaren229)
看板Biotech
标题[求救] 永远跑不漂亮的marker
时间Tue Mar 3 19:13:08 2015
大家好~打给後
我是凤梨田中的小鲁妹
有件事困扰我很久(三个月)
目前担任助理的我
帮老板跑colony PCR的胶
marker 总是跑得很奇怪
之前的实验室从来没遇过这种怪事
以下是我的实验条件
涂盘-->挑单一菌落-->Colony PCR(Product size: 0.8kb)
Gel %: 1%(将别人做Gel用剩留在锥形瓶中的，重新微波做新的一片
我们实验室有够省)
buffer：1X TBE
100V；25min
结果跑出来变这样
(同样的情况发生很多次，但有时候不会)
http://ppt.cc/eZeD
lane2,9是marker
其他是sample
marker只有一罐其他人用都没问题
我实在是找不出问题在哪
每一次跑都心惊胆跳
跑成这样根本不能当data用
请各位大大指点指点
顺手回一回 救救小鲁妹
祝大家实验顺利~~
补充说明
lane2的marker 500k 以下都跑不出来，莫名其妙的消失了
--
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1F：→ Ianthegood: 个人觉得问题是胶...03/03 19:18
2F：→ xxtomnyxx: Marker 是 commercial ready to use 的还是买 stock 自03/03 20:50
3F：→ xxtomnyxx: 己配的？03/03 20:50
是commercial的
4F：→ guise: sample loading少一点，marker像是被sample挤压03/03 23:02
sample load 12 lamda
marker load 3 lamda
5F：推 datro: TBE不是0.5X? 有没有戳到底啊?03/03 23:03
我们家都是用一倍的，学长姐学弟妹用了都OK
6F：→ guise: lane 9看似在loading时把well戳出小洞才在中间拖一条03/03 23:12
我很小心应该不太可能
7F：→ Ianthegood: agarose胶也会有sample被挤压变形的问题吗??03/03 23:31
※ 编辑: jaren229 (223.138.152.49), 03/04/2015 07:51:32
8F：推 chaunen: 遇过 似忽是loading dye配方不同 marker和sample之间空一 03/04 07:55
9F：→ chaunen: 格 03/04 07:55
10F：推 keithshih: buffer倒太多gel跑到浮起来了，稍微盖住胶面即可，你如 03/06 00:10
11F：→ keithshih: 果跑1hr说不一定1kb的band也不见了 03/06 00:10
12F：推 keithshih: smear应该是熔胶不完全或倒胶时太冷已经有结块的关系， 03/06 00:17
13F：→ keithshih: 最後如过跑100的ladder胶的浓度可以在提高点，不然100- 03/06 00:17
14F：→ keithshih: 1kb的band跑不开不漂亮 03/06 00:17
15F：推 lyu0001: 微波重复使用很常见阿 可能是制胶槽或凝胶有杂质 03/07 15:59
16F：→ satasumi: 胶的问题,没有凝好~ 03/16 08:05
17F：推 yfw: 看起来是胶的问题 要小心loading时不要搓破well 05/04 19:15