作者pent (有人试我的密码，干)
看板Biotech
标题[求救] transfer後残留在蛮多在胶上
时间Sun Mar 15 00:04:20 2015
湿式tranfer
buffer: Tris-glycine-methanol
Tris: 3.03g
glycine: 14.4g
methanol 200ml
补水到1L
10% SDS-PAGE, load 20ug protein
tranfer 条件：定30V 大约9x~11x mA, 16hr, 然後调到定60V, 29x mA 3hr
在4度C cold room
result:
http://ppt.cc/Bkex
PonceauS 可以看到100kDa以上高分子量的都看太不到
但我的western blotting不需要管那部分...
不过就是搞不懂为何会残留这麽多...
http://ppt.cc/MvSB
commassie blue发现不管高低分子量都有残留
我是抽membrane /cytosolic fraction
先用低张的tris磨和胀破组织细胞，然後用1% triton x-100,
十万转收membrane fraction
不过我的western blotting还是可以压的到讯号...似乎也没太大的影响
还是我该加个0.01% 的SDS到tranfer buffer中呢？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.109.220.139
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※ 编辑: pent (140.109.220.139), 03/15/2015 00:11:50
1F：→ blence: 我看不出condition有明显问题,但觉得奇怪的是为何ponceau 03/15 01:15
2F：→ blence: 上比marker还显着的band,却没有在CHB上看到残留? 03/15 01:17
3F：→ blence: 修正,是"marker的band还比较显着,却..." 03/15 01:21
4F：推 tynse71864: transfer时间好久喔@@ 03/15 02:11
5F：→ BGG: transfer 100v 1hr 4度，效果应该不错 03/15 17:25
6F：→ blence: 上面这个condition用在10%胶,150kda以上的很难不残留 03/15 19:30
7F：→ wang987: 为什麽要要run这麽久阿？有什麽原因吗？ 03/15 23:42
8F：→ zoe77101y: 可能是想转的效果好吧！试看看高电压，短时间！ 03/16 01:25
9F：推 rubidus: 我都100~120V随意 60~80min 5度 04/09 01:38
10F：→ rubidus: transfer buffer加1ml SDS 10% 染CBR可以到只剩180kDa up 04/09 01:40
11F：→ pent: 请问楼上，buffer里有methanol嘛？ 04/15 22:22