作者gunny362 (B勒)
看板Biotech
标题[求救] BCA蛋白质定量
时间Fri Apr 3 22:45:55 2015
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
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想请问
我欲利用强硷(10N NaOH沸水浴30 min)萃取我样品中的蛋白质,萃取完後paper说要以HCl中和,我用滴定的方式滴我的样品,但因为使用的是强酸中和,一不小心就会爆冲,得到的ph会变成6-9之间,想请问想请问不同ph对BCA assay测量可溶性蛋白的影响,如果可以我还真希望可以以强硷来直接测BCA吸光值...
还有一个问题~就是因为我的是固态样品,强硷溶解过後还是有很多固体残留,如果我在萃取之後拿强硷蛋白溶液去离心,水溶性蛋白会不会被离掉阿?如果以强酸进行中和後,会被离掉吗?
请各位大大帮帮我
没连假...赶实验中...
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1F：推 caesar0926: BCA定量的是硷性环境中作用，可以去查查看说明书会受 04/04 14:25
2F：→ caesar0926: 那些物质影响定量结果。 离心的话应该是没问题 04/04 14:26
3F：→ caesar0926: 收细胞後定量前也会离心再取上清夜去定量。 04/04 14:28
4F：→ caesar0926: 以上有错请大家指正，谢谢!! 祝你实验顺利!! 04/04 14:28
5F：→ Ice9: 生物中的酸硷中和，从来都不是以高浓度开始。你要的是稀释的 04/05 23:39
6F：→ Ice9: HCl 来达到中和的目的。如果该 paper 没写清楚作法，问作者 04/05 23:41
7F：推 Ice9: 另外，以 10N NaOH 来处理蛋白……这是什麽 protocol？ 04/05 23:45
8F：推 alex53001: 同楼上 想想了解10N NaOH萃取蛋白的protocol 04/08 13:22
9F：推 rubidus: trouble shooting 那边有写强硷强酸会减缓变色 thermo的 04/09 15:31
10F：→ rubidus: 不过也没有写多少叫强 我自己是常用 pH=8.8 的NP40 04/09 15:36