作者jenna2bb ()
看板Biotech
标题[求救] plaque assay 细胞会掉
时间Thu Apr 9 09:34:14 2015
最近做plaque assay都会有此现象，不知道有没有人知道是什麽问题
http://i.imgur.com/xcskVXQ.jpg
http://i.imgur.com/ccM88hI.jpg
连mock也是，但有些细胞没掉的地方还是会有plaque
以下是protocol
1.前一天种MDCK 6x10^5至6well，隔天约8-9分满做
2.隔天用冰E-0 DMEM稀释病毒，10^-1~10^-7，插回冰上
3.PBS wash 两次
4.各加500 ul mock及-3~-7稀释的病毒，室温15rpm 1 hr
5.PBS wash 两次
6.加入配好的0.3%agar(+E0 DMEM)+2 ul/cc trypsin
7.放30-60分钟凝固放回37℃培养
约50小时後就看出细胞掉了，有些地方有plaque
8.用10%福马林固定，室温o/n
9.冲掉，0.1%结晶紫染色
因为实验室有人也有做，都不会有这个现象，应该不是细胞或病毒或plate有问题，希望
有厉害的人能帮助我，看看我是不是有地方没注意到，谢谢!!
--
Sent from my Android
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 42.71.199.76
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1428543257.A.6C1.html
1F：推 leoblack: 可试试让细胞减量然後贴着2天後再做04/09 16:44
2F：推 greenwind: 细胞seeding不平均或是可以试试7?10^5/well04/09 23:49
3F：推 leoblack: 细胞seeding完有用十字摇荡法让细胞均匀嘛？04/10 11:31
4F：推 xenograft: 你要不要让细胞完全长满再做啊？看起来像是细胞没长好04/10 11:59
5F：推 jabari: 烫04/10 13:11
有用十字摇法
我会试着贴两天 满一点再做看看
谢谢大家~~~
※ 编辑: jenna2bb (42.68.204.26), 04/10/2015 15:09:01
6F：推 nprotei: 比较像烫死04/11 23:17
请问烫死是agar的温度吗 我是放在42℃
※ 编辑: jenna2bb (42.70.238.153), 04/13/2015 17:59:35
7F：推 nprotei: 建议用感觉的 加之前去感觉他的黏滞性加 04/13 22:58
8F：→ nprotei: 如果还是觉得是因为没长满 可以做实验前显微镜下看04/13 22:59
9F：→ nprotei: 而且正常加 overlay 後细胞还会长04/13 23:00
10F：推 leoblack: 55℃ 2X Agar+37℃ 2X medium, 1:1 混合後马上用04/14 17:46
非常谢谢大家~~
我後来让细胞长满 agar改成40℃就成功罗
觉得主要是因为细胞状况没那麽好
所以42℃对细胞来说太烫
给以後遇到同样状况的人参考
※ 编辑: jenna2bb (163.25.95.173), 05/05/2015 10:43:53