作者t123401221 (沉默玩具)
看板Biotech
标题[求救]WB压片有杂点和要看的Ab非常weak
时间Fri Apr 17 15:45:57 2015
请教各位版上的朋友
我要看的antibody 是Caspase 3, 9, 7
但我压片出来後不管是多少浓度的Ab 都看不到band
transfer 都确定protein 都有转印到NC membrane上~~~
而且还会有一点一点黑色的杂点~
如下图
http://ppt.cc/sN61
而我的条件如下:
blocking 5% milk 1.5hr
1抗是1:300 o/N
TBST wash 10min x3
2抗是 1:10000 1hr
TBST wah 10minx3
请各位有甚麽解决之道呢??
谢谢各位的协助^^
我的一抗是santa cruz这间厂牌的
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1F：→ Bows: 换一家抗体 04/17 15:47
2F：→ Bows: santa的优点只有便宜而已 04/17 15:48
3F：→ kgwu: 建议换厂牌..以前用Caspase3(santa)怎麽做都做不出来.... 04/17 16:17
4F：推 jabari: 圣诞老公公是有名的抗体乐透商 04/17 16:18
5F：→ blence: SC很爱比较有无oe immunogen或FL来确认Ab效果,可是看到隔 04/17 16:22
6F：→ blence: 壁的control lane连个band都没有,不就是宣告说这Ab不好用 04/17 16:24
7F：→ t123401221: 那请教各位有杂点是甚麽原因造成的呢? 04/17 16:30
8F：→ t123401221: 和下面那一张有些区块都是白色的???? 04/17 16:30
9F：推 tz2733: blocking为何要1.5h 感觉有点太久 另这三支抗体我作起来是 04/17 19:05
10F：→ tz2733: 整张都是杂band 建议换牌吧 04/17 19:05
11F：推 greendeer: 黑点应该是牛奶或wash solution脏掉了 04/18 12:17
12F：推 greendeer: 白色区块是ECL反应过度，已经耗掉所有2抗活性，就会剩 04/18 12:21
13F：→ greendeer: 白色，其实那是没有讯号。你看旁边都是黑色就知道讯号 04/18 12:21
14F：→ greendeer: 很强，猜想你的二抗大概也摇晃的不均匀 04/18 12:22
15F：推 stone1105: 换抗体 04/18 20:09
16F：推 tynse71864: 抗体吧 但我觉得blocking时间应该还好 04/19 16:48
17F：→ tynse71864: 有时後来不及我都会丢4度 o/n 04/19 16:48
18F：→ kg9101266: 满天星是不是因为抗体沉淀的关系?我以前也曾经遇过 04/25 21:35
19F：→ kg9101266: 但不知道该怎麽解决 求高手帮解>< 04/25 21:36