作者t123401221 (沉默玩具)
看板Biotech
标题Re: [求救]WB压片有杂点和要看的Ab非常weak
时间Sun Apr 19 19:46:19 2015
谢谢各位热心的推文
但各位的方法
我有试过例如 1抗 O/N 或是blocking O/N
都没有用还是一样有杂点和白色或全黑
我有曾经将一抗和二抗拿去离心个几秒钟~
但结果没甚麽变化~
因为目前实验室没有多余的钱可以购入新的Ab
请教各位还有甚麽办法可以解决的~~~~
感谢各位^^
※ 引述《t123401221 (沉默玩具)》之铭言：
: 请教各位版上的朋友
: 我要看的antibody 是Caspase 3, 9, 7
: 但我压片出来後不管是多少浓度的Ab 都看不到band
: transfer 都确定protein 都有转印到NC membrane上~~~
: 而且还会有一点一点黑色的杂点~
: 如下图
: http://ppt.cc/sN61
: 而我的条件如下:
: blocking 5% milk 1.5hr
: 1抗是1:300 o/N
: TBST wash 10min x3
: 2抗是 1:10000 1hr
: TBST wah 10minx3
: 请各位有甚麽解决之道呢??
: 谢谢各位的协助^^
: 我的一抗是santa cruz这间厂牌的
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1F：→ a90648: 抗体压不出来就是压不出来，被你硬弄出东西来你反而要担心 04/19 21:42
2F：→ a90648: 那东西是真的还假的 04/19 21:42
3F：→ a90648: 这种状况只能换抗体不要再想别的了 04/19 21:43
4F：→ tz2733: 没做过NC 用PVDF的经验是如果用BSA背景会比较少有杂点 但 04/19 21:51
5F：→ tz2733: 也建议换抗体 别浪费时间 04/19 21:51
6F：→ stone1105: 还是你有positive control的sample，去试试看 04/26 16:55
7F：→ stone1105: 能出来是最好，不能出来表示抗体真的有问题，赶快去换 04/26 16:57
8F：→ stone1105: 要不然你消耗耗材跟时间的成本还比去买新抗体还贵 04/26 16:58