作者jasmineapple (席得)
看板Biotech
标题[求救] 关於promoter assay
时间Tue Apr 21 18:07:13 2015
我想请教对repoter assay熟悉的人, 因为我们实验室要做promoter reporter 如下图
http://ppt.cc/~qEE
在promoter後面接mCherry的基因 (或是GFP也可以)
然後把promoter置换成我们研究的promoter
之前实验室有买commerical的plasmid
但可用的切位少之又少 (像是recommend的切位在insert中也有切点)
很多限制 不知道版上有没有人有推荐的plasmid
前阵子挖了很多资料 但好像很少是可以置换promoter的 plasmid
谢谢
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1F：→ Bows: luciferase? 04/21 18:59
2F：→ jasmineapple: 不是 是想看mCherry or GFP的表现 因为想在照片 04/21 19:06
3F：→ jasmineapple: 的形式来看。但luciferase应该只能得到一些量化的值 04/21 19:07
4F：→ jasmineapple: 老板是想看美丽的图片 哈哈 04/21 19:08
5F：→ blence: 再怎麽麻烦,用site-direct就可以变出你想要的RE site了 04/21 19:27
6F：→ jasmineapple: 是这样没错，但是是想到有很多切位的话，就可以给 04/21 21:56
7F：→ jasmineapple: 之後很多实验用了 04/21 21:56
8F：→ blence: 其实site-direct之後接MCS进去，就能广泛使用了阿 04/21 23:59
9F：→ Ianthegood: promoter切掉後做blunt再做t-tailing 做成t vector 04/22 10:32
10F：→ Ianthegood: promoter直接p出来就接进去 04/22 10:32
11F：→ jasmineapple: 请问sticky end产生後如何变成blunt end?thx 04/22 16:17
12F：→ Ice9: 用 Gibson Assembly 的方式来制作呢？听说不需要 RE sites。 04/24 02:08
13F：→ Ice9: 我个人没用过。 04/24 02:09
14F：→ alexflybaal: 之前用过pGL4,基本上就是MCS接luciferase reporter 04/24 11:29
15F：→ Ianthegood: t4 dna polymerase 04/24 14:14
16F：→ satasumi: pDL LacZ 01/05 06:39