作者gto33456789 (太人生了)
看板Biotech
标题[求救] western的膜在blocking的时候乾了
时间Wed Apr 22 11:10:24 2015
western的膜在blocking的时候蒸发太多, 乾掉了
请问有任何补救措施吗..
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推 pen88:以前觉得 鬼塚22岁还是处男很好笑 现在我笑不出来 10/19 01:47
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1F：→ kgwu: 用甲醇再活化後wash 这样应该是OK 04/22 11:13
2F：推 skyken10: 没关系的～再加ㄧ点牛奶让他湿就好了！ 04/22 13:18
3F：→ gto33456789: 因为放ON, 早上来看旁边还有中间部分乾乾的 04/22 13:59
4F：→ gto33456789: 後来再泡到transfer buffer 想说里面有甲醇 04/22 13:59
5F：→ gto33456789: 现在乾掉的地方 即使浸湿了还是是痕迹 04/22 14:00
6F：推 homeshawn: Blocking overnight不会把想测的抗原也遮蔽掉嘛0.0? 04/22 14:56
7F：→ homeshawn: Blocking overnight不会把想测的抗原也遮蔽掉嘛0.0? 04/22 14:56
8F：→ homeshawn: 重覆推文，不好意思>< 04/22 14:56
9F：→ gto33456789: 之前做的时候 是OK的 单一band蛮漂亮的 04/22 15:12
10F：→ raiyu: 回h版友 做过4度C overnight 不会有影响 只是如果用牛奶不 04/22 23:57
11F：→ raiyu: 建议blocking 超过太久 初心者时放六日 结果牛奶有点臭掉还 04/22 23:59
12F：→ raiyu: 有点分离......囧 04/23 00:00
13F：→ raiyu: ^不要超过太久 04/23 00:01
14F：推 homeshawn: 了解~ 04/23 17:47
15F：推 dehydrogenas: 一楼的你是想害死人吗 04/24 13:42
16F：推 homeshawn: 楼上怎麽说@@? 04/24 14:30
17F：推 kg9101266: 一楼没说错阿 我transfer完或是blocking後都有做过 04/25 21:30
18F：→ kg9101266: 把膜晾乾 收在防潮箱(室温) 等到要用时再用甲醇活化 04/25 21:30
19F：→ kg9101266: 只是我不知道blocking中途乾掉是不是会有blocking不均 04/25 21:31
20F：→ kg9101266: 的现象 如果是我的话 会把膜晾乾用甲醇重新复水後 04/25 21:31
21F：→ kg9101266: 再blocking30分吧(但我没这样做过喔 只是键盘分析...) 04/25 21:32
22F：→ kg9101266: 对了...仅限於PVDF 如果用NC 不可以过100%甲醇的 会溶 04/25 21:33
23F：→ kgwu: 痾..我是很认真回答..而且我真的有这样做过 04/26 13:47
24F：推 alex53001: PVDF 跟一楼一样作法过 04/27 04:20
25F：推 tynse71864: 刚做完一楼的方法压p-akt band超棒 04/27 20:16
26F：推 dehydrogenas: blocking完以後把膜晾乾 用甲醇重新复水 再染? 04/30 17:35
27F：→ dehydrogenas: 染得到东西?? 04/30 17:36
28F：推 jsi: 1F说的没错，把PVDF说明书就有写到。membrane乾燥後保存一段 05/01 00:03
29F：→ jsi: 时间，拿出来用Methanol活化，就能再使用，我就这麽做过~ 05/01 00:05
30F：推 kg9101266: blocking完以後把膜晾乾 用甲醇重新复水 可以染到 05/07 10:20
31F：→ kg9101266: 因为我做过所以肯定 05/07 10:20
32F：推 dehydrogenas: 所以你们都跑一次胶 可以染N种抗体? 05/08 15:07
33F：推 tynse71864: 一张压个10只抗体都行了吧 05/25 00:25
34F：推 MoMo123: 重复压 还是需要stripping吧??? 只是方便 不用再跑胶?? 05/27 00:38
35F：→ MoMo123: 还是甲醇过完後 就不用stripping呢?? 05/27 00:38
36F：→ MoMo123: 这样压p-akt会比没风乾的压好吗?? 真的好奇 之後要做>"< 05/27 00:39
37F：推 tynse71864: p-akt两个form我还是会分2张跑 否则会被argue strip 05/28 01:42
38F：→ tynse71864: 不均匀造成差异 05/28 01:42
39F：→ tynse71864: 还有我是不小心让membrane乾了 才水球一楼k大求救的 05/28 01:43
40F：→ tynse71864: 还是让他保持湿湿的罗 05/28 01:44
41F：→ tynse71864: 我做出来 膜乾的跟没乾的讯号差异不大 05/28 01:45