作者jmrla (我和你走散了。)
看板Biotech
标题[求救] 有关蛋白表达
时间Wed Apr 22 23:56:32 2015
最近做蛋白表达
使用PET32a质体并以E coli.(BL21)做transform
分别用IPTG和lactose做诱导
IPTG部分:
大概在OD值0.6时加入0.5mM的IPTG
以37度继续培养
加入後发现细菌几乎就不再生长了
跑胶结果也发现蛋白没有表达出来
lactose部分:
分别以28度和27度培养18小时
菌正常生长
但跑胶结果发现蛋白没有表达出来
无法确定这蛋白是否为毒蛋白
因为此蛋白相关文献极少
但加了IPTG後会抑制菌的生长
所以也怀疑此蛋白是否会毒杀菌
如果真的会毒杀菌
大概要怎麽调整条件才有可能解决这方面的问题呢
至於lactose诱导则是因为相关资讯不多
不知道有没有人有相关的经验可以分享
谢谢:)
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1F：→ blence: 加入IPTG做诱导就是告诉细菌别管复制了,要专心做蛋白阿 04/23 00:20
2F：→ huuban: 会不会是做蛋白的温度不适合呢？ 04/23 00:37
3F：→ huuban: 之前同事做过有毒性的蛋白是换系统才成功的 04/23 00:38
4F：→ Ice9: 上面可有可辨认的 fanctional domain(s)？重覆序列的 a.a.? 04/24 02:21
5F：→ Ice9: 再要不然就是 Arginine(s) 的比例太多？膜蛋白？ 04/24 02:22
6F：→ Ice9: 另外，加了 IPTG，理论上不会再让细菌分裂，但通常会多长些 04/24 02:23
7F：→ Ice9: 还有就是有确认construct出来的没有意外的 out-of-frame 吗? 04/24 02:25
8F：推 ringohare: IPTG induce的时间多长？菌长的慢正常 04/26 16:22