作者ad1980 (GluR1)
看板Biotech
标题[求救] PCR & running gel
时间Mon Apr 27 04:47:53 2015
想请问各位一个关於 PCR 的问题，
就是我最近想要 clone 一个基因，分成两段 PCR，
就是先用一组 primers (e.g. pF1 & pR1) PCR 前 1.5kb，
然後用另一组 primers (e.g. pF2 & pR2) PCR 後面 1.5kb，
再把两个 PCR products 当作 template，用 pF1 & pR2 PCR 全长，
结果跑 gel 後出现照片中红框框的结果。
http://imgur.com/JiRO3bB
请问这是什麽情况呢？
很久以前做有出现过类似的情形，
记得那时候用 PCR purification 後好像变成 band 不见了，
还是没改善，一样卡在 well，有点忘了。
那时候没找出问题出在哪，
没想到现在又碰到这个情况，
所以想请问一下有没有人知道什麽情形下会卡在 well 中，
感谢。
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1F：→ zoe77101y: 会不会是序列太长呢？ 04/28 11:10
2F：推 Ianthegood: taq大概是跑到出来长到会卡well的product... 04/28 16:47
3F：→ ad1980: 但是另一个更长的不会出现这个情况，似乎只会发生在 sewin 04/30 02:09
4F：→ ad1980: g PCR，把两段合在一起时後这样，如果是一次 PCR 3kb 就 04/30 02:09
5F：→ ad1980: 不会卡 well。 04/30 02:09
6F：→ ad1980: 是否知道如何让 Taq 不卡呢？之前有想过这个可能性，但不 04/30 02:11
7F：→ ad1980: 知如何解决。 04/30 02:11