作者pent (有人试我的密码,干)
看板Biotech
标题[求救] cryosection-snap freezing法
时间Mon May 4 00:13:44 2015
感谢上次各位版友关於cryosection脑袋厚薄的解答
另外一个问题想请教,
其实本实验室,老师有教一个比较快速
就可以把组织冻成块,当天就可以切片的方法,
简单来说,就是用2-butane,
把它用液态氮,冷到有点凝结,
如文章所言,2-butane的温度大约会到达-150度
http://tinyurl.com/qdur329 (这文还有用sucrose脱水)
我老板教我们是完全不需要脱水的,直接断颈,取组织即可冻
http://tinyurl.com/kbfv22t (像这一篇)
然後快速的把组织(在OCT里, mold)浸入,
就可以凝成块。
但是咧,如果冻的好,不会有冰晶。冻不好就很凄惨。
组织到处都是一个洞一个洞,
就我老板的观点,要做的好,2-butane一定要够冷,
要等到2-butane几乎整个都要凝结,才可以冻组织。
我想问:
冻细胞都要加DMSO防止水成为冰晶,伤害细胞了,为何这个方法,
当整个组织都到达-150度,水怎麽不会变成冰晶?
OCT可以拉出水分子??
另外,很久以前,我还能成功,拿到漂亮的组织状态图。
最近一整个凄惨,骨骼肌、心脏,都会有很严重的冰晶
快被我老板砍死了 QQ
版上,有没有人也是用这个方法?
有没有啥眉角?
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