作者polomi (polomi)
看板Biotech
标题[求救] 询问利用点突变 deletion primer设计
时间Tue Jun 9 13:48:45 2015
大家好
最近刚把一个质体构筑好，
等定序的回覆。
目前是在设计如何将其中一段N端去除，
长度为65个AA，
195的bp，
整个质体大小为3757 bp，
使用的KIT为 QuikChange@Lightning，
http://www.genomics.agilent.com/primerDesignProgram.jsp?&_requestid=212447
有使用这个网站去设计，
他所提供的bp
Primer Name Length (nt.) Tm Duplex Energy at 68 °C Energy Cost of Mismatches
del375-569-an 32 81.62℃ -49.77 kcal/mole 84.90%
del375-569 32 81.62℃ -48.73 kcal/mole 85.22%
想请问後面的两树质分别带别何义?
想请问有人做过类似的点突变的实验吗?
有那些地方要多加注意的?
感谢大家了~~~
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1F：→ Ice9: 去除一段就不叫『点』突变了。你可以 google 下关键字： 06/09 14:20
2F：→ Ice9: PCR based mutagenesis。我想这应该是你需要的。 06/09 14:20
3F：→ Ice9: 基本上设计的 primer 是在同一区域，去掉你想删掉的位置就好 06/09 14:22
4F：→ blence: 别管网站设计,直接把del两端各约16~20mer拼凑起来就是了 06/09 14:29
5F：→ polomi: 其实网站上也是直接拼接起来前後16个bp @@ 06/09 15:34
6F：→ polomi: v想请问那这样的话 Tm温度要设多少为佳? 06/09 15:34
7F：→ Dusha: 去掉一段哪叫点突变... 06/14 03:16
8F：→ polomi: 抱歉 可能要说利用点突变的KIT做片段去除的方式 06/14 16:17
9F：推 Ice9: 温度用预设的就好了。若有问题，可以考虑初始下调1~5度。 06/15 09:43
10F：→ polomi: 感谢您 06/15 10:07