作者polomi (polomi)
看板Biotech
标题[求救] PCR定序结果 forward跟reverse完全不同
时间Thu Jul 2 17:04:46 2015
最近利用pUC18做质体的构筑，
然後送给定序公司做定序，
而forward的结果是符合预期的结果，
原始档案AB1的结果除了起头外，
其余都是单一的peak。
但是revers的结果大都为杂乱无章的，
也都对不上预期的序列。
主要是使用定序公司提供的primer，
看回收结果forward是M13F(-20)，
revers端则是M13R(-24)。
而询问定序公司的结果，
则是表示我所需定序的plasmid在revers端有瑕疵的产生?
有送了三次，
因为之前主要都是只看到forward没问题，
没仔细再一次revers端是否正确，
三次都是相同的问题。
请问这是代表我的pUC18是有问题的吗?
还是会有其他原因?
抑或是我的plasmid pUC18有问题吗?
或是该如何去排除?
先在此感谢大家了~
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1F：→ Ice9: design another forward primer to read through the end… 07/02 17:46
2F：→ roy047: reverse乱黏, 可重新设计或是同一楼 07/03 14:54
3F：→ xxtomnyxx: Reverse 的定序 AB1 图是单一 peak 但是序列都不对吗？ 07/03 22:09
4F：→ blence: 看起来insert超过1k？ 07/04 00:26
5F：→ supray: 可能你的reverse primer有多个binding site吧? insert中有 07/04 23:46
6F：→ supray: 相似序列? 07/04 23:46
7F：→ supray: 同一楼 从已定出的序列设计新primer 07/04 23:49