作者ifam (用三只手指托腮)
看板Biotech
标题[求救] 冷冻切片的脑组织贴片
时间Thu Jul 16 17:24:49 2015
各位前辈好！
因为我是在新成立的部门受训，冷冻切片这一方面只有两天的实作经验就上场练习了
肌肉和肺我切的效果还不错，但是在脑组织就遇到了大问题，不管怎麽贴片，就是很容易
产生气泡或是皱摺......
问过厂商、医检师和其他助理，终於从完败进步到成功率约两百分之一.....
其他的贴片简直是惨不忍睹......
想请问有没有这方面的高手可以指引一下，该如何贴片才能够减少气泡和皱摺的产生呢？
我是使用蔗糖浓度梯度脱水，在30%时脱水两次才进行包埋的。
先谢谢看完文章的各位了！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 27.246.217.81
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1F：推 goshr: 不要完全切断, 让切好的切片回到检体上, 用毛刷整平再贴07/16 20:16
有喔，这些都有做到，可是很难贴平..我会继续练习的！
2F：推 eric2853: 看你要不要弄成floating 就是先把sample泡进PBS在贴回来07/16 23:29
意思是把sample溶掉，重新泡PBS一段时间後再用OCT包埋吗？
3F：推 yuyumom: 收脑的时候有perfusion吗07/17 10:42
有，我主要是看肝脏变成土黄色的时候就开始收组织了，以PBS灌流後直接取组织放在10%
的福马林中
※ 编辑: ifam (27.246.217.81), 07/17/2015 11:19:13
4F：推 jack33: 换糖水之前你福马林泡多久?07/17 13:14
24h
5F：推 eric2853: 不是喔 我是指你把切片切下来先丢PBS 再贴片 可能会比较07/17 15:08
6F：→ eric2853: 不会皱 所以贴合效果比较好07/17 15:08
请问是丢到1X的PBS吗？可是这样oct溶掉没有关系吗？
7F：推 eric2853: 对不起 我想错了 因为我之前做脑切片是用agarose包起来07/17 16:48
8F：→ eric2853: 用microtome切 不好意思我说错了07/17 16:48
难怪XD...因为我刚刚疑惑的试做了一次，结果切片ㄧ离开机器就溶掉了，连检体都融化
了，正要上来继续请教您的呢
不过还是谢谢你好心的提供意见喔！
继续请教各位前辈贴片的手法，拜托拜托了！
※ 编辑: ifam (27.246.217.81), 07/17/2015 16:52:59
9F：推 jack33: eric2853的方法我有看过,一样是OCT包埋.不过这比较适合07/17 17:06
10F：→ jack33: 切比较厚的情况,好像要20um或30um以上.所以你如果要5um 07/17 17:07
11F：→ jack33: 左右的冷切比较不适合.07/17 17:08
12F：→ jack33: 原PO可以试试看PBS灌流後再用福马林灌流.然後福马林泡久点 07/17 17:11
13F：→ jack33: 再换糖水. 我试过灌流PBS再加福马林.然後24H换糖水. 07/17 17:13
14F：→ jack33: 也试过完全不灌流. 脑取下来後泡福马林至少三天才换糖水.07/17 17:14
15F：→ jack33: 这两种方式下来後,切片机开-20度.切3~5um左右还算平整.07/17 17:16
16F：→ jack33: 摊脑组织片时也不太麻烦. 很容易就很在玻片上摊平. 07/17 17:19
17F：→ sunorange: OCT包埋还是可以用floating 我都是这样用的07/18 11:50
18F：推 vandia: 贴片的时候,以15-20度斜度快速拉起来 07/19 23:32
19F：推 hchung: 原po在哪个单位? 以前冷冻切片切脑或切骨头都OK~ 07/21 22:36
20F：→ hchung: 若可以现场看的话，会比较知道你的问题在哪里~~07/21 22:37
因为是新成立的部门，我也很菜，可能比较不方便让外宾进出。但若是您愿意提供作法（
前处理）或是其他意见，我会很谢谢你的！
21F：推 kakaman: 嗯 欢迎站内信 07/22 06:15
※ 编辑: ifam (27.240.55.167), 07/23/2015 11:33:14
22F：推 H75610: PBS灌流後会再福马林灌流,再用福马林浸泡overnight,surcos 08/01 01:06
23F：→ H75610: e脱水,OCT包埋前记得把脑上的液体用乾,让包埋效果更完整, 08/01 01:06
24F：→ H75610: 切片时候脑片会更完整,更容易贴片 08/01 01:06