作者monicatsen (monicatsen)
看板Biotech
标题[讨论] talon 纯化蛋白
时间Sat Aug 22 18:48:57 2015
嗨 大家 想要跟大家请教一下
我最近在做纯化蛋白 利用E.coli的system 再用talon的resin纯化 his tag protein
但因为我们家没有gel filtration的仪器
所以我纯化完後就直接用amicon的浓缩管浓缩去除离子
接着 用浓缩完的产物做in vitro demethylation
原本是预期没有作用（当negative control,没有催化活性的domain）
但今天测试居然能够demethylation
可能是纯化没做gel filtration 导致蛋白不够纯造成的吗？
还是 我的蛋白真的能够demethylation？
谢谢
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1F：→ Ice9: 我第一个怀疑的是construct。是点突变成的domain吗？ 08/23 00:33
2F：→ xxtomnyxx: 试试看让 E.coli transform 没有表现蛋白的质体或是表 08/23 01:51
3F：→ xxtomnyxx: 现 EGFP 之类的质体，然後做一样的纯化步骤，看产物能 08/23 01:52
4F：→ xxtomnyxx: 不能一样产生 demethylation 就知道是不是纯化不够了。 08/23 01:53
5F：推 Marriott: 怀疑不够纯 先跑片sds page吧 08/23 15:24