作者monicatsen (monicatsen)
看板Biotech
标题Re: [讨论] talon 纯化蛋白
时间Sun Aug 23 18:14:21 2015
其实 一开始就跑了SDS
除了目标蛋白60kda外 在45kda左右也有一条
因为没有gel filtration system
目前是想用Mwco30kda的浓缩管在去离心
想问一下这个方法有办法移除 45kda的蛋白吗？
※ 引述《monicatsen (monicatsen)》之铭言：
: 嗨 大家 想要跟大家请教一下
: 我最近在做纯化蛋白 利用E.coli的system 再用talon的resin纯化 his tag protein
: 但因为我们家没有gel filtration的仪器
: 所以我纯化完後就直接用amicon的浓缩管浓缩去除离子
: 接着 用浓缩完的产物做in vitro demethylation
: 原本是预期没有作用（当negative control,没有催化活性的domain）
: 但今天测试居然能够demethylation
: 可能是纯化没做gel filtration 导致蛋白不够纯造成的吗？
: 还是 我的蛋白真的能够demethylation？
: 谢谢
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1F：推 abcam: 30/45kDa 分子量太近……我不认为 浓缩管是好方法 08/23 20:57
2F：→ monicatsen: 嗨 我只想保留60kda大小的蛋白 45kda是我想去除的 08/23 21:47
3F：→ monicatsen: 还是用50kda？ 08/23 21:52
4F：推 Marriott: 但不用太期盼会有很好的效果 08/23 22:14
5F：→ Marriott: talon完後 再多上支MonoQ/S?? 08/23 22:16
6F：→ Ice9: 45KDa 产物是出现在什麽时候？induction期间，还是纯化时？ 08/24 00:26
7F：推 gps0110: ion exchange column看看 08/24 06:18
8F：推 icome: COMW参考用 不能保证刚好就切在那个分子量 08/24 20:15