作者aaaazzzz (找英文家教)
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标题[讨论] 请问trypsin可以拿到37度水浴槽warm吗？
时间Fri Aug 28 23:19:07 2015
请问trypsin可以拿到37度水浴槽warm吗？
我先前的作法(几乎本实验室所有人的作法)，
会事先从冰箱把trypsin先摆在常温5-20分钟，
先开始继代步骤，
加了trypsin之後，
会放在incubator 1-5分钟，
用显微镜看有无把细胞打下来。
有时候赶时间，
trypsin可能常温摆个1-2分钟，
就开始继代，
但会发现这时候的细胞就不容易打下来。
所以我想既然加入trypsin之後还要摆进去37度的incubator，
那是否可整罐trypsin直接放到37度水浴槽warm一下，
可节省时间，
但想到酵素放到37度，
会不会失去活性。
在此请教各位先进前辈的意见，
谢谢！
PS:有先爬文，看到一篇2006年的写说他们的实验室都会把trypsin放到水浴槽
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1F：推 caesar0926: 我认为不要放置太久应该是可以，怕酵素自切。 08/28 23:28
2F：→ caesar0926: 虽然我的方法都是同你第一个方法，在warm medium的时 08/28 23:28
3F：→ caesar0926: trypsin放在室温一起等。 08/28 23:30
4F：→ caesar0926: 怕的话就尽量分装吧?? 08/28 23:32
5F：→ blence: 我很讨厌有人放水浴漕,用久了愈来愈没效,都冰箱出来直接用 08/29 07:06
6F：→ blence: 所以1X 0.05%对一般癌细胞2-5分钟都可起来 08/29 07:09
7F：→ blence: 10cm用0.7cc,不过应该算trypsin不多加,细胞就直接放进37度 08/29 07:13
8F：推 leptoneta: 怕回温太多次的话 分装不就好了 08/29 11:26
9F：→ aaaazzzz: 我实验室有两种方法,一种10cm给2cc的trypsin之後，从第 08/29 14:12
10F：→ aaaazzzz: 一盘逐盘吸起来,再放到incubator。第二种10cm dish加入 08/29 14:13
11F：→ aaaazzzz: 1cc trypsin後，直接放入incubator,之後再直接medium中 08/29 14:14
12F：→ aaaazzzz: 和。谢谢c大与L大提供分装的意见。 08/29 14:17
13F：→ aaaazzzz: 所以大家进culture room直接把少量的trypsin warm，然後 08/29 14:19
14F：→ aaaazzzz: 观察细胞，观察完开始做实验，省掉等trypsin在室温升温 08/29 14:20
15F：→ aaaazzzz: 的时间？ 08/29 14:20
16F：推 babebabe: 我们实验室也都会分装到15cc离心管跟medium一起拿去warm 08/29 14:52
17F：→ babebabe: ,在用完之前都不会有切不动的情况发生 08/29 14:52
18F：推 payton103075: 我们以往也都是分装在15mL离心管 跟medium一同回温 08/29 15:01
19F：→ michaelhsien: 我们用50mL Trypsin都放37℃回温，没差啊! 08/29 19:53
20F：→ michaelhsien: 有些同学忘记，放了几个小时... 还是可以用XD 08/29 19:54
21F：→ aaaazzzz: 了解，这样可以减少trypsin放在室温回温的时间，谢谢！ 08/29 21:54
22F：推 kg9101266: 我以前跟某博学的时候他也都是和培养液一起回温 08/30 11:59
23F：→ kg9101266: 只有PBS是用冰的 说甚麽会让细胞悬浮得较好... 08/30 12:00
24F：推 LIAR: 我trypsin在10cm都用3ml耶？因为怕没盖到，1ml不会乾掉吗？ 08/30 21:41
25F：→ aaaazzzz: 我用两cc吸掉摆进去,好像还好,拍一下,细胞有飘浮的感觉 08/30 22:35
26F：→ travelmat: 我跟过的lab都分装後37回温，听说太频繁会失活，但我没 08/31 07:00
27F：→ travelmat: 遇过 08/31 07:00
28F：→ travelmat: 另外我没遇过冰的任何液体直接加细胞耶，这样不是会造 08/31 07:01
29F：→ travelmat: 成stress吗？ 08/31 07:01
30F：→ blence: 为什麽有需要多加trypsin再吸掉才放37度,何不少加就好 08/31 09:11
31F：→ blence: 多数遇不到失活,是因为加多,加2X浓度,又分装使用 08/31 09:19
32F：→ blence: 我用完借别人常常放37度几小时以上的,就需要加几倍用量 08/31 09:23
33F：→ blence: 如果没遇到效率变差,请在少量的trypsin试试有无觉得差异 08/31 09:27
34F：→ blence: 一般on-dish lyse 10cm用0.5cc就够了,trypsin也不担心覆盖 08/31 09:32
35F：→ blence: 之前好问兄提问medium最小体积,必竟太少体积生长会不稳, 08/31 09:38
36F：→ blence: 但trypsin少加如果OK,也不用一手续把trypsin吸掉才放37度 08/31 09:42