作者allthebest (allthebest)
看板Biotech
标题[求救] ELISA sample加HCl 和NaOH
时间Tue Sep 1 17:29:11 2015
R&D的elisa kit 是要自己先手动coating的kit
protocol里面写sample 要pretreat
在100ul sample+50 ul 1N HCl incubate10
min 再加45ul 1N NaOH
这个步骤是了为什麽？纯粹矫正ph值吗？
因为我sample里面标的蛋白的浓度已经很低了 加了HCl跟NaOH会更加稀释掉了
所以想知道加酸跟硷是不是必须的步骤 还是可以直接用原始sample测呢？谢谢大家
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1F：推 utadalove: 我们也是R&D system,也是自己coating,但是没这个步骤 09/01 18:34
2F：→ allthebest: 蛤 是喔 09/01 19:57
3F：→ allthebest: btw 是 R&D DuoSet 系列 09/01 19:58
4F：推 qiet: 要看你的目标蛋白, 可能是有和其他component有interaction 09/01 20:44
5F：→ qiet: 会影响到抗体辨认才用酸去破坏交互作用吧 09/01 20:45
6F：→ Ice9: 加1/2体积的1N强酸硷下去，你不觉得这个很暴力吗？ 09/02 07:00
7F：→ allthebest: 由於他protocol没有多加解释原因 所以我也挺烦恼 09/02 16:28
8F：→ allthebest: 也没有说不同类型的检体是否有不同操作手段 09/02 16:31
9F：→ allthebest: 决定写信问原厂比较快~~ 09/02 16:37
10F：→ allthebest: 刚跟R&D 技术员livechat 他说如果原始测的出OD 09/02 16:59
11F：→ allthebest: Ok 的话，不一定要加酸跟硷 09/02 17:00
12F：→ Ice9: 我看了DuoSet kit的描述，看到它是为了使TGF-beta1成为免疫 09/02 17:00
13F：→ allthebest: livechat还不错不用等回信 只是对方打字好快..XD 09/02 17:01
14F：→ Ice9: 活化状态，以使得抗体能辨认。所以，加酸加硷下去，就是为了 09/02 17:02
15F：→ Ice9: 加酸破坏其三四级结构，曝露出epitope。然後加强硷(有hepes) 09/02 17:03
16F：→ Ice9: 中和整个溶液，免得後来的抗原抗体後应没有效果。 09/02 17:05
17F：→ Ice9: 所以才会用暴力方式作用。 09/02 17:06