作者REIDO (NEET)
看板Biotech
标题[求救] western会有黑暗星云出现
时间Tue Sep 22 20:03:27 2015
http://tinyurl.com/ort2zx5
http://tinyurl.com/nrpayvk
这是我泡western常会看到的现象，某区域会完全没讯号，背景和target都是。
我一抗是用夹链袋，blocking,二抗和ECL是加在塑胶盒中，有确定在shaker上
可以自由移动
从时间点上来分类有几种可能
1.membrane在转印前就有问题了，无法protein binding
2.blocking和1抗没结合
3.2抗没结合
4.ECL没泡到
第一项，机率很低吧？
第二项，我觉得这种因素顶多没有target，不会到连背景都消失
第三项....机率也不高，因为塑胶盒中的membrane可移动，应该都有泡到
第四项，我先把membrane丢到ECL盒子中，拿出来贴在盘子上，上面又继续淋ECL盖到满
，机率应该也不高
总之目前我想不通，想请问有人知道这原因是什麽吗？
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小黄小黄别生气，明天带你去看戏。
我坐椅子你坐地，我吃鸡腿你啃骨。
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1F：推 caesar0926: 1.请问用什麽blocking 2.WASH 次数 3.一二抗各泡在哪 09/22 21:00
2F：推 mesenchymal: transfer完用Ponceau S染membrane确认第一项 09/22 23:54
3F：→ mesenchymal: 搞不好就是气泡或其它问题导致transfer不完全 09/22 23:55
4F：推 ljii: 1.transfer 没密合或是膜和胶之间有东西 2. 手指摸到膜 09/23 10:05
5F：推 david31408: membrane存放多久了??? 你有用镊子吗? 09/26 22:57
6F：→ blackphantom: 看起来像transfer时有气泡，不像blocking失败 09/29 20:57
7F：推 LIAR: 不过transfer失败的话，应该还是会有背景值吧?lane和lane之 10/12 00:05
8F：→ LIAR: 间的亮度，那边也太黑了吧？ 10/12 00:06