作者grassshan (纸飞机啊欧欧踢欸死)
看板Biotech
标题[求救] Stripping 时间?
时间Wed Sep 30 13:24:24 2015
最近在做Western 想试试同张膜重Hy抗体
我们家Stripping Buffer是自己泡的~
pH是6.7
膜是PVDF膜
昨天刚照完冷光,想要洗一下重新Hy Actin
但翻遍实验室的protocol...只有找到怎麽泡阿 QAQ!!!!
上网查跟问同学 好像 要加热? 还有看到厂商卖的只要stripping 五分钟?
想请问版上大大~
通常自己泡的Stripping buffer,会怎麽使用呢?
加热的意思是 整罐里面丢stir 放加热器上加热 再淋在膜上吗 囧?
我查Stripping时间大概都在30分钟内,
那结束後是从blocking开始,还是直接就可以Hy一抗了呢?
有需要我後续再补上完整配方~!!
感谢各位大大 >_<
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.135.61.97
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※ 编辑: grassshan (140.135.61.97), 09/30/2015 13:25:50
1F：推 blueness1225: 我们家是整罐里面丢stir 放加热器上搅拌均匀再淋在 09/30 14:21
2F：→ blueness1225: 膜上。 09/30 14:21
3F：→ blueness1225: Stripping放在60度水浴槽30分钟,结束後是从blocking 09/30 14:21
4F：→ blueness1225: 开始,再Hy一抗 09/30 14:21
5F：推 tynse71864: 时间要依前一只强度调整哦！ 09/30 16:38
6F：→ tynse71864: 我家是50度7分钟 strip完在用tbst洗5分钟3次 之後blo 09/30 16:40
7F：→ tynse71864: ck 09/30 16:40
8F：→ tynse71864: wash 3次很重要！！不然第二只抗体会爆炸 09/30 16:40
9F：推 pandagod: 记得之前看过一篇文章是说stripping不如重跑一张XD 10/06 12:30
10F：→ pandagod: 如果只是test antibody倒是还好，定量就... 10/06 12:30
11F：推 Fongshin: 有用过跟厂商买的，用室温三分钟即可，还被我们拿来reus 11/03 19:17
12F：→ Fongshin: e，效果还不错 11/03 19:17