作者yoyokid (Anthony Joshua)
看板Biotech
标题[求救] PCR蒸发
时间Thu Oct 15 11:24:59 2015
是的本鲁悲惨的研究生 研究的题目是做出一台PCR机器
跑完温度循环 在监测SYBR Green的萤光 但目前卡在
检体滴入我设计的卡匣 放到机器加热後 检体整个蒸发乾
也试过加入矿物油(mineral oil) 检体20ul+10ul的矿物油
但依然还是蒸发殆尽 我查过文献 矿物油、甘油、石蜡油
都有人使用来防止蒸发 这三种有什麽差异性吗?
有没有人可以提供一些建议 救救我这硕2.5的可怜延毕生
感谢万分!!!
附上我的卡匣设计 :
http://imgur.com/71E2IKm
以压克力当基材 用雷射切割出圆孔 再使用双面胶将
铝箔纸黏住当成底部 检体注入後 再透过双面胶将
透明投影片黏住 使他整个密封
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1F：推 tsubasawolfy: 1. 上盖有无加热 2.密封气密性如 10/15 11:43
1.上盖无加热 2.气密性应该是还可以 因为我卡匣滴入检体密封後
放了两个礼拜以上 里面的检体都还在
2F：→ blence: 矿物油是旧式机型会用到的,石蜡油我不知道 10/15 11:48
3F：→ blence: 甘油在你检体就内含,加入与水互容稀释体积,更抑制酵素活性 10/15 11:50
※ 编辑: yoyokid (140.116.78.236), 10/15/2015 15:45:35
4F：→ patricksky: 材料加热过後 膨胀溢出? 10/15 20:51
5F：→ patricksky: 先把有颜色液体装入卡夹 丢到95度C热水环境做检测吧 10/15 20:52
6F：→ patricksky: 检查是否会液体溢出 10/15 20:52
7F：推 huangsw: 热涨冷缩的因素考虑进去没？ 感觉你上下的强度不够... 10/15 22:12
8F：→ amou0303: 基本上做qPCR的管子盖子密合度要非常高，我认为是密合 10/15 23:47
9F：→ amou0303: 度不够才蒸发的。 10/15 23:47
10F：→ Ice9: 你的双面胶加碰到油之後加热到接近100度C时会怎样？ 10/16 00:44
11F：→ Ice9: 你的气密性设定有放着加热两星期吗？ 10/16 00:45
12F：→ Ice9: 还有反覆地昇降温对於双面胶的黏性有没有什麽影响？ 10/16 00:45
13F：→ Ice9: 个人觉得P大的建议很好用，有做过类似的检测吗？ 10/16 00:50
14F：→ Ice9: 你的设计似乎是不用微量管的。那污染问题要怎麽解决？ 10/16 00:51
15F：→ Ice9: 还是我误会了？如果是我误会，我会觉得微量管有问题。 10/16 00:53
16F：→ Ice9: 另外有没有可能会是加热太快，让样本冲出封锁？XDD 10/16 00:56
双面胶可耐热到135度 我设计非微量管 是半径2mm的圆
我觉得是我压克力热变形後使得密合度 变差甚至有缝隙
17F：推 cain07: 密合度不够~~上周有做状况跟你一样~~换上膜之後就解决了~ 10/19 02:27
请问可以分享一下你用什麽上膜吗? 或是详细分享你的专案做个讨论
※ 编辑: yoyokid (140.116.78.236), 10/20/2015 13:10:19
18F：→ Ice9: 那双面胶在碰到油的状态下，加热时会稳定吗？ 10/20 20:31
我有试过P大的方法 卡匣里滴20ul墨水+10ul矿物油然後密封 分别丢在常温水里
与100度的水里 都没有溢出的现象 我觉得问题出在我加热只有单面 导致有温差
使得卡匣热膨胀弯曲 破坏了我原本的密闭性
※ 编辑: yoyokid (140.116.78.236), 10/21/2015 15:00:44