作者GanLinBa (Fait votre père)
看板Biotech
标题[求救] clone
时间Fri Oct 30 04:12:20 2015
我想把我的gene接到pflag-cmv-2
Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TCA TCG ATA...........
-------------------------------------------
MCS
如果用EcoR1(G^AATTC) 去切把我基因接近去
Met-Flag peptide sequence-CTT GCG GCC GCG AAT TC-gene
请问这样可以吗 gene自己有start coden 所以会转入
如果今天flag是在尾端 gene的前端可以随意选 而尾端必须不能shift否则无法表现flag
可是今天flag在前端 但TC後面如果接上start coden的第一个A
会shift start coden (inframe/frame的问题)
1.假设我这样接 flag会表现 那gene呢? 是不是就不会表现?
2.还是他自己有start coden 所以promoter开始做 protein 还是会translation
感谢
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1F：→ blence: 你已经知道1跟2的答案了,既然Flag跟gene的表现不会在同一 10/30 09:39
2F：→ blence: 个polypeptide上,这样做不就是接心酸的 10/30 09:41
3F：→ GanLinBa: 感谢1f 所以flag 和 我的protein 都会有 10/30 10:47
4F：→ GanLinBa: 但用flag antibody 可能就压不到我protein位子 10/30 10:48
5F：→ GanLinBa: 也就是IP即使抓得到flag但没我的protein在上面？ 10/30 10:49
6F：→ blence: 你在绕口令,把整个seq进去translation,就知道产物是什麽了 10/30 11:29
7F：→ Ice9: 你干嘛纠结在这种问题上？会 frame-shift 就应该要重接啊。 10/30 15:58
8F：→ Ice9: 1.那东西就不会是你想像的原来那个，虽然 flag-??? 会存在。 10/30 16:00
9F：→ Ice9: 但能不能撑到被你发现又是另一个问题了，但绝不是你要担心的 10/30 16:01
10F：→ Ice9: 2.in vitro状况下有可能会选择其他ATG而被侦测到，但细胞内 10/30 16:04
11F：→ Ice9: 的表现，你想看到选择其他 start codon 的产物，并不容易。 10/30 16:05