作者yu12ling06 (ling)
看板Biotech
标题[求救] 循环肿瘤细胞萤光
时间Wed Nov 11 14:02:25 2015
各位版上高手大家好
Lab进行循环肿瘤细胞分离与染色的实验,发现一个不知道怎麽解释的情况:
先说明一下作法:利用仪器从全血中将血球细胞与循环肿瘤细胞分离後仪器会自动进行染
色(CD45, EpCAM, CK, DAPI)并收集在chip中
白血球细胞会呈现:CD45+, DAPI+ EpCAM-, CK-; 循环肿瘤细胞则会呈现:CD45-, DAPI+
EpCAM+, CK+
目前遇到的情况是, 染色完立即进行显微镜拍摄,所观察到的循环肿瘤细胞与白血球细
胞的萤光都较微弱,但chip在经一二个星期避光保存後再拿出来拍摄,会发现循环肿瘤细
胞与白血球细胞的萤光都明显增强,尤其是循环肿瘤细胞的萤光较实验完立即拍摄强上几
百倍
就过去在实验室的经验,萤光应该会是慢慢decade,还没遇到越来越强的现象
目前推测
1. Chip中有EpCAM, CK, CD45萤光抗体残留?
2. 虽然经仪器分离, chip中仍有许多红血球残留, 而遮蔽了萤光, 随着红血球被用来固
定的福马林lysis, 遮蔽逐渐消失?
请问大家有什麽看法?会是什麽原因造成的?(苦恼中)
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1F:推 jabari: 让mounting作用一会儿 11/11 15:26
2F:→ yu12ling06: 没有加mounting solution耶 11/11 21:28
3F:推 supray: 背景变弱 所以感觉讯号增强了? 11/12 09:25
4F:推 jabari: 可能就是RBC被lysis了.. 还是说萤光硬起来了Q_Q? XD 11/13 00:46