作者smallmin (小明)
看板Biotech
标题[求救] SDS-PAGE sample太黏稠 很难沉到well底部
时间Mon Nov 23 22:41:11 2015
我今天在跑SDS-PAGE
sample是E. coli expression total protein
就是取1 ml菌液 5000 g 离心1分钟
去上清液 加入80 ul 2X sample buffer
100C 煮5分钟 煮完spin down
冷却後直接load到well 不分可不可溶
每个well load 10 ul
我有一部份sample可能因为菌量太浓
sample非常浓稠 tip会被堵住 很难吸取
我用12,000 rpm 离心 1分钟
还是没有pellet沉淀
直接load到well 因为太黏稠 sample里面有气泡
气泡被包在sample里 很难除掉
导致sample会从well里浮上来 沉不下去
请问各位遇到这种状况怎麽处理?
如果我换4X或5X sample buffer会比较好吗?
谢谢
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1F：推 miki3327: +Urea 11/24 00:25
2F：推 jabari: sonication 11/24 01:12
3F：→ blence: 如下篇所说,用100~200ul加buffer去煮就好,多取无益 11/24 01:29
4F：→ blence: (是取100～200ul的菌液离心後的pellet) 11/24 01:31
5F：推 fentanyl945: Sonication 11/24 05:16
6F：推 michealking: sample buffer哪家的? 11/24 13:06
7F：→ michealking: 如果太浓稠可以不用取这麽多或是先超音波震一下 11/24 13:06
8F：→ michealking: 先试试看少量的先定量抓浓度 11/24 13:07
9F：推 dennisyoung7: 煮十分钟就解套了, 敲简单~ 11/24 21:47
10F：→ smallmin: 感谢大家提供的意见 11/24 22:22