作者shinchenboy (欣承男孩)
看板Biotech
标题[求救] CHX与Protein stability assay
时间Thu Nov 26 16:00:31 2015
各位版友大大们好
小弟我最近实验要去测试某Non-coding RNA对某Protein stability的影响
实验设计主要是藉由加入了CHX这个药物之後抑制translation的进行
之後收各个时间点的protein然後跑western
藉此来看target protein的降解现象
然而我现在遇到的问题是
我CHX药物剂量从1提高到10ug/ml
时间点收到24h
我要看的target protein似乎没有甚麽影响
我的细胞(MCF7)感觉也好好的没有甚麽大量凋亡的现象(理论上来说细胞的转译活动
抑制了应该渐渐会有细胞活不下去吧...)
跟老板讨论 老板觉得CHX可以在增加 不然就是把收的时间点拉长
可是我查paper
好像几乎没看到有CHX加超过10ug/ml的
有没有人收超过24h
还是说是CHX没有work?(可是CHX是新买的)
我的CHX是溶在酒精里 4度C保存
我要看的Protein是NDRG1 Paper上做过类似的实验的时间点是到8h就有效果
CHX也只加5ug/ml
所以我的问题到底出在哪咧?
有请各位大大们小弟解惑了
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1F：→ blence: 你一定要收24h吗？ 11/26 16:12
2F：→ blence: CHX应该不少用20~100ug/ml, 时间在2～8h之间 11/26 16:13
3F：→ lail: 有可能你的target半生期很长啊 11/26 20:07
4F：→ Ice9: 1.如blence建议，加大，缩短看看；2.Ab可辨其他NDRG2,3,xxx? 11/26 22:47
5F：→ untilnow: 这不是常PO_文又自删的帐号吗 11/27 15:49
6F：→ untilnow: 回错篇 SORRY 11/27 15:49
7F：推 michealking: MCF7有这麽敏感吗，直接测下游gene表现吧? 11/27 18:14