作者seethegame (影子)
看板Biotech
标题[求救] Mammalian two hybrid system
时间Sun Nov 29 01:18:17 2015
最近在做Mammalian two hybrid assay
使用的vector分别为: pM-X pvp16-y以及pg5seap
细胞株:NIH3T3
transfection reagent:lipofectamine 3000
方法是:
1.将NIH3T3放在1ml opti-mem in 6 well
2.将pM-x:pvp16-y:pg5seap =3:3:1的比例已lipofectamine 3000送进细胞
DNA总量为:5ug
3.第2天换成1ml growth medium(含FBS)
4.将medium取出并加热65度 30分钟 然後以冷光侦测
因为是预测试 所以组别只有1.pM-X pvp16-y pg5seap 和2.pg5seap only
原本想说就算两个蛋白没有交互作用seap含量也应该是1=2
可是测出的结果却是2>>1
所以想请教各位前辈这大概是怎样的情形 谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 122.117.10.237
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1448731099.A.3F0.html
1F：→ blence: 猜2.的plasmid没有在实验操作上成为1.的合理对照 11/29 01:25
理论上pg5seap在没有pM和pvp16的情况下是没办法表现seap
可是出现这样的结果会让人很困惑
※ 编辑: seethegame (122.117.10.237), 11/29/2015 01:32:27
2F：→ blence: 只有表现很低到背景值，不可能完全没有表现 11/29 01:37
3F：→ blence: 别的不说,只送pg5seap送0.1ug或1ug,结果也会有差 11/29 01:39
4F：→ blence: 第一句推文在说,两组seap在transfect过程没控制到一样的量 11/29 01:42