作者blence ( )
看板Biotech
标题Re: [求救] ELISA稀释几倍都OD值差不多
时间Wed Dec 16 20:13:13 2015
以下只以你们所使用的这支Ab来源为例子
并非完全只所有Mybiosource的产品
关於这个kit所使用的CYP3A2 antibody
其host是rabbit，immunogen是rat CYP3A2 C-ter
应该与Mybiosource网页上的anti-CYP3A2 Ab (MBS534856)相同
也就是MBS534856是卖你抗体，MBS9310896则是卖你ELISA kit
ELISA kit操作的部分
我搜寻一下我有兴趣的基因，全部都出ELISA，连没几篇paper的基因也有
其中，多数的manual都是under request
少数有PDF的，每篇内容说明除了适用substrate与物种会有差异(而且还highlight)
剩下的内容是跟你的CYP3A2只是copy/paste
我怀疑花心思研究这个protocol的价值会有多少
你可以试试看其他ELISA kit manual是不是真的如此
类似的例子就像是SantaCruz抗体
不管哪一支都建议你用1:100~1:1000，浓度不是0.1就是0.2ug/ul
所以好像没遇过有人会把它当真
抗体的部分
前面提到该抗体是rabbit anti-rat CYP3A2 c-ter
去Biocompare看一下，总共有约8家共十几支CYP3A2抗体
有趣的是，除了Merck EMD的immunogen是human，怎麽其他都是rabbit anti-rat？
是因为rat CPY3A2很重要？ 还是每家的抗体其实是同一来源？
而且immunogen都只写CYP3A2 c-ter，好巧
然後以下是这几家rabbit anti-CYP3A2的价格，很不正式的列表 (100ul, USD)
antibodies-online 589+45(shipping)
Fitzgerald 415+26(shipping)
Lifespan 700
Mybiosource 535
USBiological (需注册)
Abcam 370 (25ul only)
Enzo 328 (103 for 25ul)
假使这支抗体是各家自己制造的，选哪一家还可以看品牌信任度
如果是同一来源，想也知道不该当冤大头阿
顺便提一下，或许常买的话也会知道
某些公司的抗体存在价差，往往跟上述现象有关
回到你的问题
我对抗体比较熟，ELISA则是没碰过
对於这抗体是否好用，是否能用在tissue lysate等问题若无法确认
就算Mybiosource真的有实验室帮你们做好plate coating
还提供synthetic peptide当PTC
关键还是在这支抗体在rat tissue有没有效
至少上面几家抗体商也都没有秀data来佐证阿
以上是我的看法，只是实验操作还是没帮到忙
※ 编辑: blence (140.109.40.29), 12/16/2015 20:13:33
1F：推 psyche133182: 非常感谢你的看法，我觉得很有帮助!关於抗体部分， 12/17 10:14
2F：→ psyche133182: 以前是购买merck，但它今年抗体说QC没过，打算停产 12/17 10:14
3F：→ psyche133182: 不卖，所以如果是以上几间厂牌，你会推荐哪个呢?还 12/17 10:14
4F：→ psyche133182: 是真的都是同一来源呢 12/17 10:14
5F：→ blence: 基本上是同一来源,现在卖抗体常常这样 12/17 10:58
6F：→ blence: 以为有很多选择,原来怎麽选都是同一来源 12/17 10:58
7F：推 psyche133182: 都是rat会不会是因为3A2只在rat中有，其他物种没有 12/17 12:14
8F：→ psyche133182: ，有的是相似的subfamily，像是人类为3A4，但sequen 12/17 12:14
9F：→ psyche133182: ce和3A2有71%相似，所以才会看到都是以rat来做，但 12/17 12:14
10F：→ psyche133182: 如果是这样，我同样使用应该要测得到才对，毕竟来源 12/17 12:14
11F：→ psyche133182: 都是rat了，且如果真的抗体来源都一样，扣除已经停 12/17 12:14
12F：→ psyche133182: 产的merck，这样我不管选择哪个kit，如果抗体同家， 12/17 12:14
13F：→ psyche133182: 那是不是都一样做不出来，可以这样说吗? 12/17 12:14
14F：→ blence: 当然不是阿,用human打的抗体,也常常连human lysate认不到 12/17 14:33
15F：→ blence: 你查一下MBS9413770, ab119330, LS-C205193, 20R-2736 12/17 14:33
16F：→ blence: ABIN2034547, ProSci 79-727 12/17 14:34
17F：→ blence: 都是认MELK的抗体,不同公司怎麽放的figure都一样 12/17 14:35
18F：→ blence: 是因为大家都做的一样,还是现在抗体都同一来源?不难分辨 12/17 14:37
19F：推 psyche133182: 私信请教你抗体问题，谢谢!! 12/17 15:33
20F：推 jabari: 圣诞老公公躺着也中枪... 射死他QwQ 12/27 01:24