作者michaelhsien (MichaelHsien)
看板Biotech
标题[讨论] competent cell (胜任细胞)
时间Sun Dec 20 18:43:52 2015
最近实验室在做中研院的CRISPR实验
中研院建议使用 Invtirogen 的 E.coli
Stbl3 strain
来放大他们所提供的 lentiviral vector (plasmid)
因为这类的plasmid在
DH5alpha中
会有产量低、甚至发生重组(变异)的问题
但是这一株competent cell，一个反应要价
$700元左右
波仕特代理的Endura
G10 strain，也要
$400元左右
(相较於DH5alpha，一管大概$50元...感觉差很多)
最近实验室可能会大量使用CRISPR
为了节省老板的钱...
想起以前大学的时候，会自己做胜任细胞
虽然转型效率不比市售的好
但是想想
顶多把plasmid加多点，或涂多点菌也是可以吧??
↑是这样吗? XD
我要transform的东西
不是ligation products
而是一般construct好的plasmids
所以
转型效率对我而言可能不是很重要
(这些胜任细胞的genotype/phenogype才是我要的吧...)
还是之後的问题没有我想像中的单纯? XD
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1F：推 tynse71864: 建议询问对方吧 不用 dh5a 应该有特殊理由 12/20 18:56
2F：推 shelix: lenti-vector用DH5alpha会发现很多重组的clones,光挑到 12/20 19:11
3F：→ shelix: 正确的就饱了 12/20 19:12
4F：推 silverberry: 建议一定要用 stbl3 系的菌种来做。不过自己做 12/20 22:38
5F：→ silverberry: competent cell 是没问题的。ligation product 12/20 22:39
6F：→ silverberry: 多转一点就是了。 12/20 22:39
7F：→ storm780121: 有做过这只的胜任细胞 用起来ok der 12/20 23:43
8F：→ a90648: 我个人是用dh5a完全长不出来 12/21 14:58
9F：→ untilnow: 为什麽要省老板的钱 浪费自已的时间？ 12/21 20:13
10F：推 qiet: Sigma好像有一只没那麽贵的可以用. 12/21 20:49
11F：→ qiet: DH5alpha以前用过, 要人品够好就做得出来XDD 12/21 20:50
12F：→ blence: 可以拿到菌之後,找台厂代制生产 12/21 23:27
13F：→ blence: 台湾有几个厂牌在做quick transform,其中有会帮人代工 12/21 23:29
14F：推 leoblack: 用建议的菌会快很多~用DH5alpha也可以做~只是要挑clone 12/22 10:49
15F：→ leoblack: 且一路都要送sequence再三确认序列有无突变 12/22 10:49
16F：推 michealking: 1.不用帮老板省钱，做出对的才是重点 12/24 16:30
17F：→ michealking: 2.DH5alpha要用也可以啦 可是你要多浪费时间跑胶 PCR 12/24 16:32
18F：→ michealking: 时间上一点也不划算啊~~~ 12/24 16:32
19F：推 alaric: 别浪费时间了, 把钱花下去就是了. 12/24 21:20
20F：推 linporu: 花钱买时间实际很多 12/25 01:50
21F：推 mandible: 用lentivirus vector backbone 最好建议一定要用stbl2/3 12/26 13:57
22F：→ mandible: 的原因不光光是efficiency 的问题，也要造成transforma 12/26 13:57
23F：→ mandible: tion mutations！建议还是不要乱换competent cell 12/26 13:57
24F：推 Realthugz: 可以自己放大 到不要白痴到换strain 01/06 12:47
25F：推 Realthugz: lenti或是rosa26都要用这株 01/06 12:48
26F：→ Realthugz: 有同事没注意用dh5a卡了很久才问我 01/06 12:49
27F：推 hitmd: NEB也有不错的 可以参考看看 01/08 12:34