作者forever430 (Right of Left)
看板Biotech
标题[求救] 细胞计数
时间Fri Dec 25 16:25:40 2015
大家好
想请问将细胞培养在基材上，想利用trypan blue计算
在基材上活细胞的数量，之间的过程会先用trypsin将
细胞取下然後与medium混合终止反应，接着直接使用
trypan blue进行计数没有经过离心的步骤，这样可以吗?
基材的培养面积为4平方公分，加入的细胞为5万颗，之前
几次的实验有经过离心误差都满大，有的组别甚至测不到
细胞数量，所以想说可能是离心完後细胞太少被我倒掉了。
请版友帮忙解惑 感谢
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1F：推 moon0126: 我们实验室数细胞都不离心的，以打下来的浓度跟体积去计 12/25 18:17
2F：→ moon0126: 算总细胞数 12/25 18:17
3F：→ forever430: 楼上大大一样使用trypan blue吗? 12/25 19:20
4F：→ moon0126: 是trypan blue没错! 12/25 21:19
5F：→ forever430: OK 那我就不离心分离trypsin，直接计数试看看 感谢 12/25 22:46
6F：→ Echinocyte: 我们也不离，除非细胞浓度不够，才会2000rpm 2分钟然 12/26 00:50
7F：→ Echinocyte: 後抽掉一部分上清液再重算 12/26 00:50
8F：推 Echinocyte: 突然发现，推116 XDD 12/26 00:56
9F：推 osla30: 想顺带问问，数完也不离心直接再种回去培养吗？ 12/26 17:35
10F：→ Echinocyte: trypsin→medium回溶→全吸起来→加要的量(0.5-1ml)到 12/26 21:32
11F：→ Echinocyte: 新盘→剩的放离心管，再取50uL+50uL trypan blue来数 12/26 21:32
12F：→ forever430: 好奇一问：medium终止trypsin反应有多少体积比的根据 12/26 22:48
13F：→ forever430: 吗？ 12/26 22:48
14F：→ archlich: 1:1也可，重点在你养的细胞对trypsin敏不敏感，normal 12/27 22:02
15F：→ archlich: cell建议利用离心移除trypsin再进行实验。 12/27 22:02
16F：推 moon0126: 我们实验室trypsin：medium会到1：3 12/27 22:42
17F：→ moon0126: 如果非癌细胞的话，会加入trypsin覆盖後吸掉，放incubat 12/27 22:43
18F：→ moon0126: or反应 12/27 22:43
19F：→ blence: 加入trypsin又吸掉是为了什麽? 12/28 08:31
20F：→ blence: 既然这样何不加少一点 12/28 08:32
21F：→ forever430: 个人感觉：液态太少没有覆盖基材，反覆吸冲会产生泡泡 12/28 16:25
22F：→ blence: 反覆吸冲的目的是？ 体积太少是覆盖不了,但体积多到可以 12/28 16:54
23F：→ blence: 那轻拍摇晃一下就够了,没有反覆吸冲的需求阿 12/28 16:55
24F：→ forever430: 我自己习惯没有在轻拍，都用tip吸冲(看个人手法) 12/28 17:46
25F：→ forever430: 以24的flask养，1mL的trypsin就无法覆盖，均匀润一下 12/28 17:52
26F：→ forever430: 放到培养箱30秒~1分钟，拿出来轻拍或冲吸都可 12/28 17:53
27F：→ blence: 以我来说100mm dish(area 55cm2)约0.7ml, 60mmdish(21cm2) 12/28 18:58
28F：→ blence: 约0.3ml,因此T25(25cm2)对我来说用1ml绰绰有余了 12/28 18:59
29F：→ blence: 不过就算T25用1ml,我还是无法理解冲吸後再把trypsin吸掉的 12/28 19:01
30F：→ blence: 理由 (还是其实不是吸掉,只是去除泡泡?) 12/28 19:01
31F：→ moon0126: 以0.05%的trypsin来说，10cm dish加0.3-0.4ml, 6cm dish 12/28 19:30
32F：→ moon0126: 加0.2-0.3ml, 放常温一分钟可用冲吸将我们家的癌细胞 12/28 19:30
33F：→ moon0126: 打下来，但normal cell line则会在trypsin覆盖後，将多 12/28 19:31
34F：→ moon0126: 余的trypsin吸掉，培养箱反应，加如medium冲吸打下，这 12/28 19:31
35F：→ moon0126: 样的方式对於我们家的正常细胞伤害比较小。 12/28 19:31