作者amou0303 (阿毛)
看板Biotech
标题Re: [求救] Culture medium western
时间Mon Jan 11 13:44:47 2016
SDS-PAGE 样品局部过浓现象,想像一下一个2M窄窄的走道给大家跑步,但是光胖子
就有100人之谱,当然塞车阿,所以会歪七扭八的。
想办法把 medium 中 FBS 来源的 albumin 去除,试试看 centtricon 吧。
另外复杂样品不建议用ELISA,是不是乱黏你看不出来,如果乱黏造成假讯号又要浪
费时间。
※ 引述《tynse71864 (TATA box)》之铭言:
: 大家好
: 我的实验想看在culture medium (10%FBS) 里
: overexpress的 target protein 有多少被secret出来
: 因此目前的做法是
: 直接收mediumm,loading 约1/500下去做western
: western压的到我要看的protein(16~17kda) 但是极丑....
: http://0rz.tw/UMKNU
: 由於medium中有很多BSA / IgG / lipid杂七杂八的东西
: 所以跑的时候会大扭曲
: 目前没有考虑做elisa (因为secretion的量很多
: 抗体也无法做IP
: 因此想知道有无方法 可以处理这样子的sample
: 让western不会跑歪
: 目前有想到的方法是:
: 1.Dilute sample,取更少的量
: (但因为之後要做endogenous,我怕之後此方法会不能用
: 2.加一些detergent进去 (?) 如SDS
: 查过的paper都只有写 load medium,不太会写怎麽处理
: 想问有无类似经验的版友们可以分享经验呢?
: 谢谢!
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