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SDS-PAGE 样品局部过浓现象,想像一下一个2M窄窄的走道给大家跑步,但是光胖子 就有100人之谱,当然塞车阿,所以会歪七扭八的。 想办法把 medium 中 FBS 来源的 albumin 去除,试试看 centtricon 吧。 另外复杂样品不建议用ELISA,是不是乱黏你看不出来,如果乱黏造成假讯号又要浪 费时间。 ※ 引述《tynse71864 (TATA box)》之铭言: : 大家好 : 我的实验想看在culture medium (10%FBS) 里 : overexpress的 target protein 有多少被secret出来 : 因此目前的做法是 : 直接收mediumm,loading 约1/500下去做western : western压的到我要看的protein(16~17kda) 但是极丑.... : http://0rz.tw/UMKNU : 由於medium中有很多BSA / IgG / lipid杂七杂八的东西 : 所以跑的时候会大扭曲 : 目前没有考虑做elisa (因为secretion的量很多 : 抗体也无法做IP : 因此想知道有无方法 可以处理这样子的sample : 让western不会跑歪 : 目前有想到的方法是: : 1.Dilute sample,取更少的量 : (但因为之後要做endogenous,我怕之後此方法会不能用 : 2.加一些detergent进去 (?) 如SDS : 查过的paper都只有写 load medium,不太会写怎麽处理 : 想问有无类似经验的版友们可以分享经验呢? : 谢谢! --



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