作者WMB (踏出改变的第一步)
看板Biotech
标题[求救] SYBR做QPCR
时间Tue Jan 26 11:14:30 2016
实验是要从plasma里萃取cfDNA，再用Q-PCR定量
目前的实验流程是前任助理开发的
用Roche High Pure Viral Nucleic Acid Kit萃取DNA
机台是ABI StepOnePlus，使用ABI的Mastermix
现在的状况是
用伯昂代理的ThermoHotStarr Master Mix可以做出PCR产物，
但是用ABI的Master Mix做Q-PCR则没有PCR产物
所以我想问的是
1.有哪间厂商还有在卖SYBR Green?
我想要外加到ThermoHotStarr Master Mix来做Q-PCR
已经问过莱富、进阶、伯昂、波仕特都没有，
好像这两年全世界都只想卖SYBR master mix不卖SYBR染剂了
2.自己外加SYBR Green I做Q-PCR除了要再加ROX dye之外有哪些注意事项?
比如使用的浓度或是稀释用的buffer?
3.还有哪家厂商的SYBR Green Master mix好用?
试用过波仕特最近新代理的，会有杂band。
进阶的则不给试用包。
4.我有点怀疑Roche这个kit可能不够力，
各位做cfDNA都是用哪家的kit在抽DNA?
感恩
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 110.30.163.201
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1453778077.A.B0E.html
1F：→ blence: SYBR green(我知道的)最早是molecular probe卖的,後来被 01/26 11:27
2F：→ blence: invitrogen买下,又跟ABI并与被Thermo-fisher并,所以莱富一 01/26 11:28
3F：→ blence: 定有卖 01/26 11:29
4F：→ blence: SYBR Green I (S-7567) 01/26 11:31
谢谢，
invitrogen被Thermo-fisher并购，但仍是进阶代理
ABI被Life并购又被Thermo-fisher并购，目前仍是莱富代理
进阶和莱富的业务都帮我查过原厂已经不卖SYBR Green I了
只有SYBR Master Mix
明明他们的Taq就不够强，干嘛放弃有SYBR需要的客户啊...
※ 编辑: WMB (110.30.163.201), 01/26/2016 17:57:12
5F：→ blence: 不是的,是Invitrogen与ABI合并组成Life Technologies 01/26 18:25
6F：→ blence: 原厂网页还有价格还可订购,你要不要直接问台湾分公司? 01/26 19:05
7F：→ blence: SYBR Green I不是只有qPCR,一般染色也会用到 01/26 19:06
8F：→ johanjohan: 采血管也许有影响 01/26 22:52
※ 编辑: WMB (124.8.73.194), 01/26/2016 23:02:50
9F：→ xxtomnyxx: 今天刚好看到一篇用 cfDNA 分析的 paper，那篇 paper 01/26 23:15
10F：→ xxtomnyxx: 是用 QiaAMP Circulating Nucleic Acids kit (QIAGEN) 01/26 23:15
11F：→ xxtomnyxx: 纯化血浆中的 cfDNA 01/26 23:15
12F：推 bahrimank: 我们家实验室SYBR是用Roche原厂的，没有杂band的情况 01/27 21:31
13F：→ Fongshin: 目前整套从RNA到cDNA是用QIAEN的试剂，SYBR 也是跟他们 01/28 09:27
14F：→ Fongshin: 买的，因为使用量很大，研毅和创世纪是最近有在接触的厂 01/28 09:27
15F：→ Fongshin: 商 01/28 09:27
16F：推 allisa: 可以参考QIAGEN的试剂 02/15 23:08
17F：→ akta: 个人认为最好用的是Lonza SYBR green II 04/06 01:11