※ 引述《Tsuyokunaru (小强)》之铭言： : 大家好　因为我不是生科相关科系的　但是因为实验会牵涉到PCR : 所以有些问题想请教...... : 我们一直都是用HBV当TEMPLATE (然後用自行设计的机构跑PCR) : 只是最近想复制长片段 出现一些问题 : 跑胶後结果是亮在低於100bp的位置@@ (primer是大於400的) 这primer好长…还是是指产物长度？ 这麽长的primer会不会有二次结构问题？ 而且primer这麽长，primer dimer应该也很长吧 所以我大胆猜是产物长度？ 至於100bps那个，我觉得是primer dimer : 不管是我们的机台还是传统机台 所以推测是我们DNA来源没有那麽长? : 那是PRIMER DIMER吗? 还有其他可能性吗? : 然後请教相关科系学姊 她说可以用plasmid当template : 浓度是 0.1mg/ul : 这边我有点不懂...... 你学姊讲得也不够精确， 她只给你浓度，没告诉你要放多少量… 这个 总之，用plasmid做模板不需要放太多量 我自己喜欢从「plasmid 总量10ng」开始进行PCR （plasmid浓度太高就要稀释） : 因为我们之前都是用例如 10^8 copies/ul 来标记浓度 : 那这样我要怎麽转换?? : 我查了一下 硷基对平均分子量660/mole : 我看到有外国类似知识+的论坛有这个回答 : https://goo.gl/K5VpxV : 可是 660 x 6 billion = 3.96 pico gram (pg) ??? u : 不懂这是什麽意思？ : 所以还是想请问有人能浅显易懂的解说一下吗QQ 1. 那个讨论串有另一个人提出看法啊， 不过他们在算的是基因体的量 而且也有人说他PCR会放多少「总量」的plasmid做为模板… 2.你可以用“nucleotide 分子量”去搜寻 应该可以找到较明确的换算法 （前提是你要知道你的plasmid有多少base pair） : 然後更换成这个TEMPLATE後 : 我们的机台还是跑在低於100bp... 传统就的确在正确位置了 : 这样是anealing extension 时间不够?? 还是温度不够? 温度太高? : 因为短primer是ok的...... 有可能是机台温度不够精准吗？ （纯猜测，机器相关的问题我不懂@@…） : 然後还有一个蠢问题 : 查了一下plasmid 这好像是细菌或酵母菌之类才有的 : 可是HBV 不是病毒吗@@？ 天然状况下，plasmid的确主要存在於细菌中 但在现在已经变成一个十分普遍的研究工具 你用的plamid是人工制造的产物， 至少包含你PCR 的目标基因 : 因为不是学生物的　　真的不是很懂这块　　但是还是想要了解基本的 : 麻烦板友多多指教一下！！ 我会的大概就是这些， 希望有帮到你， 若有错误的也欢迎板友指正:-) ----- Sent from JPTT on my Sony D6653. --

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