※ 引述《Tsuyokunaru (小强)》之铭言： : 大家好　因为我不是生科相关科系的　但是因为实验会牵涉到PCR PCR的目的之一是复制双股DNA PCR的主角有两个 一个是primer，是小片段的单股DNA，通常是一对， 每个通常15~25 base pair左右，用来认定你想复制的DNA区域，具有专一性 另一个是当作template(模板)的DNA : 所以有些问题想请教...... : 我们一直都是用HBV当TEMPLATE (然後用自行设计的机构跑PCR) : 只是最近想复制长片段 出现一些问题 为什麽想要复制长片段? 实验目的为何? 复制长片段的步骤是换了primer还是换了不同种DNA来源? 一般正常情况下，一组primer可以认定一种DNA区域，其复制出的长度大小固定 同一种DNA当作template，要变换复制的DNA长度，要重新设计primer。 : 跑胶後结果是亮在低於100bp的位置@@ (primer是大於400的) : 不管是我们的机台还是传统机台 所以推测是我们DNA来源没有那麽长? : 那是PRIMER DIMER吗? 还有其他可能性吗? : 然後请教相关科系学姊 她说可以用plasmid当template 我觉得...这地方是不是把plasmid和HBV DNA搞混了... 一般高等生物都只有染色体DNA 而plasmid DNA有别於染色体DNA，可以自我复制，通常长度比较短，通常是环状 ，多存在於细菌和酵母菌。 HBV的DNA是部分环状结构的DNA，不是染色体DNA，也不是palsmid DNA 所有DNA都可以是template，但是primer所认定的DNA区域只有当初设计出来的人知道 ，并且一定要有留下primer的相关资料。 : 浓度是 0.1mg/ul : 这边我有点不懂...... : 因为我们之前都是用例如 10^8 copies/ul 来标记浓度 : 那这样我要怎麽转换?? : 我查了一下 硷基对平均分子量660/mole : 我看到有外国类似知识+的论坛有这个回答 : https://goo.gl/K5VpxV : 可是 660 x 6 billion = 3.96 pico gram (pg) ??? : 不懂这是什麽意思？ : 所以还是想请问有人能浅显易懂的解说一下吗QQ 浓度转换google就有了，不过这不是重点 一般下的量是10-100 ng DNA or 1000-10000 copy DNA就PCR够用了 : 然後更换成这个TEMPLATE後 所以换了不同种DNA? : 我们的机台还是跑在低於100bp... 传统就的确在正确位置了 所以这指的是换了不同PCR机台? : 这样是anealing extension 时间不够?? 还是温度不够? 温度太高? 程式跑一样的情况下，不会换了机台就出问题，除非当初你设定的程式两台不一样... : 因为短primer是ok的...... 所以换了不同primer? : 然後还有一个蠢问题 : 查了一下plasmid 这好像是细菌或酵母菌之类才有的 有别於染色体DNA，本身比较小，可以独自自我复制的DNA，通常存在於细菌和酵母菌 可以wiki查一下 https://en.wikipedia.org/wiki/Plasmid : 可是HBV 不是病毒吗@@？ HBV是病毒，遗传物质是DNA，但不属於染色体DNA或plasmid DNA : 因为不是学生物的　　真的不是很懂这块　　但是还是想要了解基本的 : 麻烦板友多多指教一下！！ --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 203.65.71.253 ※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1455516297.A.D65.html ※ 编辑: patricksky (203.65.71.253), 02/15/2016 14:07:44