作者Astrophyllit (Astrophyllit)
看板Biotech
标题[求救] 含甘油保存剂之生物样品的蛋白质萃取方法？
时间Thu Mar 10 00:38:34 2016
哥哥没有帐号所以代p.o
可能会回覆比较慢
如题
我的样品应含有甘油保存剂
想要萃取其蛋白质
而後进行蛋白质二维胶体电泳、寻找未知的功能性蛋白质
因样品含甘油，不太好前处理
跪求适合的方法或protocol
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 114.47.9.234
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1F：→ tynse71864: 标题怪怪的 ? 03/10 00:52
2F：→ Astrophyllit: 跪求～含甘油保存剂之生物样品的蛋白质萃取方法？03/10 01:04
3F：→ Astrophyllit: 感谢告知 其实我也第一次发文 没注意到标题字数03/10 01:06
※ 编辑: Astrophyllit (114.47.9.234), 03/10/2016 01:07:35
4F：推 wanderchang: 透析03/10 19:40
5F：→ Ianthegood: 所以sample是什麽? suspension culture? trizol?03/10 23:29
6F：→ Ianthegood: phenol? cell pellet?03/10 23:30
7F：推 Sherry5566: 透析+1，看是用透析管还是透析膜，端看你蛋白的耐受03/11 16:18
8F：→ Sherry5566: 度03/11 16:18
wanderchang: 透析
我回答：我的样品未知其蛋白质资讯，只知道是厂商坚称含有酵素成分的污泥沉降剂(用於处理废水)，透析膜孔径大小的选择可能是一件难事！？
→ Ianthegood: 所以sample是什麽? suspension culture? trizol?
哈哈！我的样品不是动物组织、植物、细胞、没有 suspension culture 和 pellet 可言耶！但是超高速离心後倒是可以把那褐色的沉降物当成pellet，去掉上清液。
另请问trizol是萃取RNA的试剂？？
→ Ianthegood: phenol? cell pellet?
我回答：有人好像有建议过含油类的样品可以用Phenol法萃取，但一开始不知道如何前处理，超高速离心，假装它有pellet？呜呜
※ 编辑: Astrophyllit (49.215.19.158), 03/11/2016 16:35:27
9F：推 leoblack: 跑个FPLC,用Desalting column置换成没有甘油的buf 03/11 17:00
10F：推 star55555: 怎样萃取蛋白？ 03/11 18:44
11F：推 wanderchang: 3k大约30个胺基酸，你的东西听起来是个酵素，不至於 03/11 21:35
12F：→ wanderchang: 比这还小？ 03/11 21:35
13F：→ wanderchang: 透析完再做活性测试 03/11 21:37
14F：→ Ice9: 蛋白过透析，还要考虑缓冲液和pH值。就怕凝集或降解。 03/13 03:19
15F：→ Sherry5566: 你的酵素很耐吗？ 用desalting column是快速的透析 03/14 10:49
16F：→ Sherry5566: 有可能变性喔！ 03/14 10:49