作者l19911012 (全省吃透透)
看板Biotech
标题[求救] ELISA做不出来～烦请各位大大指点
时间Wed Mar 16 16:09:04 2016
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
若是求救事项涉及实验室智慧财产(例如细胞细菌植株、质体载体等）之分让，
请务必注明贵实验室愿意设立 正式合作或 签署材料分让协议(MTA)，否则版工将迳行删除
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
我的实验是从空盘开始coating
从过年前试到现在都做不出来
有思考过是不是因为没有binding上去的问题
从原本的夹心法换成直接先种抗原
还是做不出来
我的抗原是IgG
Buffer也是carbonate 和PBS都试过
不知道是不是我在wash时有问题
我通常垂直向下倒
然後well里没有液体
不知道这样有没有问题
请各位大大救救我～
手机排版请原谅～
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1F：→ lesswind: 还是你coating的时候就出问题了呢? 03/16 16:28
2F：→ YAHO0: 做不出来有很多种做不出来 把情况描述清楚 03/16 21:40
3F：→ jsi: commercial kit还是自己开发的套组? 用错盘子? coating buf. 03/16 22:55
4F：→ jsi: 用甚麽buffer? 03/16 22:55
5F：→ Fongshin: 写的有点简略，可以在写清楚一点吗 03/16 23:23
6F：推 leoblack: 是repeat不出来？还是Ab根本不认native蛋白？ 03/17 09:32
7F：→ l19911012: coating buffer 就是试过PBS和carbonate 03/17 23:09
8F：→ l19911012: 盘子是用PS材质的去coating 因为我是要 03/17 23:09
9F：→ l19911012: 用我自己的系统去做显色来测抗原 所以跟 03/17 23:09
10F：→ l19911012: 一般二抗後面的步骤不太一样 有试过药品 03/17 23:09
11F：→ l19911012: 应该没有问题 我的抗体跟抗原也是同源 所 03/17 23:09
12F：→ l19911012: 以不知道问题出在哪 03/17 23:09
13F：推 psamei8098: 可能是药品坏掉 03/19 00:55
14F：推 ararthur: 很有可能是药品坏掉+1 特别是protein 我之前就是用了放 04/03 03:04
15F：→ ararthur: 超过三个月的recombinant protein 整个结合力出了大问题 04/03 03:04
16F：→ ararthur: 不过你还是应该详述一下所谓的"做不出来" 是哪里做不出 04/03 03:04
17F：→ ararthur: 来、结果呈现什麽情形？ 04/03 03:05
18F：→ ararthur: 如果是curve完全无法拉得出来 建议要先做详细的titrate 04/03 03:05
19F：→ ararthur: 才能确定每一个chemical是在适当的浓度下 否则饱和或未 04/03 03:06
20F：→ ararthur: 到敏感度限制的时候 是完全无法看出curve变化的 04/03 03:06