作者Altrose1993 (Altrose)
看板Biotech
标题[求救] MTT assay
时间Fri Apr 8 11:13:28 2016
小妹最近在做化疗药物对癌细胞影响的生长曲线
使用MTT assay
步骤如下：
1.先将细胞使用trypsin切下後去离心再悬浮1cc medium，之後去计数细胞
2.种在96well，每1well 1500颗细胞
3.会把算好的细胞数加到15cc 离心管的medium里面去votex(因为之前都打散但不均匀所
以想到此方法)
4.等24小时後再去加8个不同浓度的药物
5.等72小时加入MTT试剂，再等3小时加入DMSO之後去测吸光值。
所遇到的问题如下：
种细胞的时候都会看有没有种均匀
每次都看有种均匀了 但加药72小时後细胞都没有受到药物毒杀的影响!!!!(长得超好超满
)
可是之前学长做曲线都有出来...
药物浓度跟细胞数都跟学长先前的实验一样没有改
所以很困惑到底是哪里做错了QAQ
还请大大们解惑，谢谢
--
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1F：→ roy047: 药坏了 04/08 11:39
2F：→ Altrose1993: 回r大，药应该没有坏!! 因为另一个细胞株曲线有出来 04/08 11:50
3F：→ Altrose1993: ，抱歉忘记讲了 04/08 11:50
4F：→ blence: 所以你跟学长用不同细胞？ 04/08 12:04
5F：→ Altrose1993: 细胞跟药都是一样的QQ 04/08 12:10
6F：→ untilnow: 药的有效期限?有没有反覆冻溶? 04/08 12:47
7F：推 leptoneta: 请学长repeat一次确认有效 04/08 13:18
8F：推 Smango: 请跟你学长好好讨论实验细节 04/08 13:38
9F：→ htLiu: 药浓度稀释错了? 04/08 16:23
10F：推 greenmoon00: 药怎麽加的？建议跟medium先配好再加 04/09 07:44
11F：→ greenmoon00: 有些人会直接把药加进去，很容易误差 04/09 07:44
12F：推 jieyuwang: 细胞太少看不出误差？ 04/09 14:32
13F：→ Altrose1993: 回g大，药是跟medium混合的 04/13 08:15
14F：→ Altrose1993: 回h大，已经有重算，药稀释倍率没有问题.... 04/13 08:16
15F：→ Altrose1993: 感谢大家的回覆QQ已经有好好跟学长讨论了 最近会重 04/13 08:17
16F：→ Altrose1993: 做 04/13 08:17
17F：推 roc0860: 我的细胞数是3000/1well,然後MTT作用4hr，给你参考 04/14 23:29
18F：推 lackgirl: 能附上吸光值数值吗? 04/14 23:52
19F：→ chvkimo: 实验条件都一样 那麽操作方法有一样? 04/17 02:03
20F：→ chvkimo: 就像你将cell打散的方法 04/17 02:04
21F：→ Dreamwakeup: 1.查药有没有 light sensitive 04/27 16:20
22F：→ Dreamwakeup: 如果有...可能药坏掉了... 04/27 16:30
23F：→ Dreamwakeup: 2.我是用 1ml pipetman打散较"团结"的细胞块 vertex 04/27 16:32
24F：→ Dreamwakeup: 太强怕 伤细胞 04/27 16:32
25F：→ Dreamwakeup: 3.呃..我种6000or 8000/cell ,48H. XD 04/27 16:34
26F：→ Dreamwakeup: 4.然後请学长用你用过的细胞 同批药 "同样"步骤重复 04/27 16:44
27F：→ Dreamwakeup: 实验 如果...还是不一样 ..呃...就无解惹.. 04/27 16:44
28F：→ Dreamwakeup: 不过我移除 treated drug的medium後 MTT只处理20~40 04/27 16:49
29F：→ Dreamwakeup: min 就是了吸光0.6~0.8偶尔破个1这样 XD 04/27 16:49
30F：推 a910298: 会不会是细胞计数算错,加太多细胞了?? 05/31 10:18