作者lackgirl (爱幻想)
看板Biotech
标题[求救] 细胞实验，关於时间点的问题
时间Wed Apr 27 12:55:52 2016
实验目的:想观察SW480经过不同时间的serum stavation(12hr，24hr)
会不会因为时间的长短不同，产生apoptosis现象
参考此文章:因为Western blot ，未经药物诱导的细胞也有看到cleavage caspase8
而此药物主要观察的现象是诱导necrosis，所以想确认是否为实验过程所诱导的
https://www.researchgate.net/post/How_can_I_do_serum_starvation_for_suspended_
cells
实验流程:1.细胞分盘等待贴盘时间固定12hr
2.serum stavation 固定12hr & 24hr两个时间点
3.模拟treated drug 时间 16hr
4.flow cytometry
核心问题:如果我使用不同批cell line，想要观察时间点的差异，能可以解释此现象
会因为时间不同而型态有所不同吗?
例如:甲:A盘直接分B两个条件的细胞(12hr,24hr)出来，
(困扰的地方，会做很晚)
乙:使用不同盘的细胞，A盘分B(12hr)，C盘分D(24hr)，但实验条件相同
另外还有个小小的问题:
如果不同种Cell line间想要比较的话，当中serum stavation 时间不同的话
要怎使实验一致。
**不同的意思是，因为有使用初代细胞，有文献指出这种细胞serum stavation
过长会漂浮，所以想问看看要怎麽解决，还是在文章里面标示清楚就好?
文章有点长 感谢大家
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1F：→ blence: 一般seeding都是等24h再进行後续实验;模拟drug 16hr是为了 04/27 13:04
2F：→ blence: 产生apoptosis？ 一般为了方便都6,8,或24h,是特殊drug吗？ 04/27 13:05
3F：→ blence: 我的习惯会先试甲,但修改成作息方便的操作条件 04/27 13:07
※ 编辑: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:58:54
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※ 编辑: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 13:59:57
4F：→ lackgirl: Seeding後24h是为了让细胞型态回到正常的状态吗? 04/27 14:01
5F：→ lackgirl: 这样的话细胞数量要怎麽估计 04/27 14:02
6F：→ lackgirl: 之前有用过这株细胞做过WST-1 assay OD值与细胞数的关系 04/27 14:04
7F：→ lackgirl: 条件是用这样，因为实验室这株细胞已使用约几年时间 04/27 14:05
8F：→ lackgirl: 所以有点不确定doubling time会与来源很相近 04/27 14:06
※ 编辑: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 15:46:23
9F：推 aaaazzzz: 像我习惯是下午种细胞，隔日上午进行後续处理(如 04/27 16:55
10F：→ aaaazzzz: starvation,加药等) 04/27 16:55
11F：→ aaaazzzz: 我记得先前starvation时间过长,会发生细胞死亡(显微镜) 04/27 16:56
12F：→ aaaazzzz: 但没有特别去压caspase 3(要跑12%的胶，有点麻烦) 04/27 16:57
13F：推 qiet: 不太懂做这实验的目的, 平常用药物处理的时候不也会有组 04/27 17:31
14F：→ qiet: 对照组吗, 应该就是serum starvation时间和实验组相同的 04/27 17:31
15F：→ qiet: DMSO or 其他vehicle control 04/27 17:31
16F：→ lackgirl: 因为control 组也有看到caspase 表现量 04/27 18:25
※ 编辑: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:35:20
※ 编辑: lackgirl (140.114.100.128), 04/27/2016 18:38:00
17F：→ blence: 我也不太懂,不能甲分盘後取normal,12h,24h starved这三盘 04/27 21:27
18F：→ blence: 直接看caspase 8 WB? 04/27 21:28
19F：→ lackgirl: WB 比较费工XD 那我直接还是照原本计画走好了T^T 04/27 21:51
20F：→ lackgirl: 因为有4个cell line要做 WB会做到晕 04/27 21:52
21F：→ Ice9: 我们是要求这类实验，细胞要至少过了一次 doubling time 才 04/28 06:54
22F：→ Ice9: 开始。若是初代细胞问题，那就限制所有实验细胞都是初代的。 04/28 06:55
23F：→ lackgirl: 使用初代的目的是想确认normal cell与cancer cell 04/28 12:23
24F：→ lackgirl: 药物作用後的差异 04/28 12:23