作者ad1980 (吱吱)
看板Biotech
标题[求救] WB protein ladder 反光
时间Sun May 15 12:24:31 2016
大家好，又来请问 WB 的问题，
我同时做 primary antibody incubation 了三张 membrane，
antibody 都是 re-used 的前几次做都没问题，
protein ladder 加的量也都没变，
但是昨天做的两张，protein ladder 反白（如图）。
http://imgur.com/jhDjesJ
请问有没有人知道这是什麽原因吗？感谢。
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1F：推 tynse71864: 记得是讯号太强爆掉 05/15 13:00
2F：→ ad1980: 爆掉不是右边全黑的那点吗？我的如果爆掉在 membrane 上可 05/15 14:08
3F：→ ad1980: 以看到焦掉，但显影会全黑不会反白，protein ladder 从 m 05/15 14:08
4F：→ ad1980: embrane 肉眼看没焦，不会比右边那块黑点讯号强。 05/15 14:08
5F：推 tynse71864: 你搜寻板上 “反白” ，可能可以找到一些原因 05/15 14:45
6F：推 Ianthegood: 我以前反白也是爆掉 但是你的condition都跟之前一样吧 05/16 07:58
7F：→ blence: unstain ladder? ECL从头用到尾? Rab? membrane reprobe? 05/16 19:35
8F：→ blence: marker不像是烧掉 (反而倒数第二marker位置的band烧掉了?) 05/16 19:36
9F：→ ad1980: 我的 condition 跟之前一样，有一张一起做的没这种情形。 05/17 01:09
10F：→ ad1980: 爆掉是倒数第二大黑点的那个没错，marker 应该不是爆掉， 05/17 01:09
11F：→ ad1980: 但不知道为什麽会反白。 05/17 01:09
12F：→ ad1980: Marker 是 prestained，ECL 每张 membrane 都有还新的， 05/17 01:10
13F：→ ad1980: 不是 reprobe。 05/17 01:10
14F：推 michealking: ECL下的不够均匀 累积在那也会这样 05/17 16:19
15F：→ ad1980: Stripping 完後 reprobe，ladder 的反白消失了，只是我一 05/19 02:36
16F：→ ad1980: 直都用同样的步骤，同样的方式去泡 ECL，不知道为什麽就这 05/19 02:36
17F：→ ad1980: 两张出现这个问题。@@ 05/19 02:36