爬文好像没看到有人有这个问题 小弟最近刚培养的SF9型态上不太正常，有椭圆还有长条状，甚至还有些特别大(确定不是 污染) 但是还是硬把它继代下去，想说看会不会越来越健康，但是结果时好时坏 我在解冻之後分了四代，继代两次之後长的比较好(大小形状较一致，圆形) 想说应该稳定了，结果再分下去型态又开始怪怪的 起初有想过培养基有问题(一个月前配制)，但换了培养基之後还是一样 想说可能那批冻的细胞比较不好，所以有解冻另外一批看看，也是一样的情形 小弟的培养基是 grace 90% FBS 10% (57度煮30分钟) PS 1% 解冻方式 取出液态氮的细胞，在27度水浴下迅速解冻至细胞尚有少许冰晶 吸出细胞至离心管，加入10ml预热的培养基 离心，去除液体，再加入10ml预热的培养基，将细胞冲散 再次离心，以去除抗冻剂，接着去除液体，加入10ml培养基冲散并且注入T75 flask中 放入27度培养箱中 一小时之後换新的培养基，接着20小时後再换一次，24小时再换一次，细胞就长的差不多 了 继代方式是用手拍下来再分盘 小弟目前是怀疑温度的影响，第一个是培养箱开门之後由於细胞培养房的温度较低，培养 箱会降温一点，接着为了维持设定的温度会再升回去，只是升温後不会刚好停在27度，会 升到28度左右再慢慢降回去，所以整个恒温系统在开培养箱之後会暂时不太稳定 另外是细胞培养房的温度都是在22度左右，不知道在外面操作时间稍微长一点是否会导致 培养基变冷，还有拿出来的细胞感受到的温度也太低，只是实验室培养的其他细胞株都养 的好好的，所以也不确定这个因素有影响 由於现在实验室SF9只剩小弟在养了，也不知道如何是好 上网找不太到答案，有阿豆仔说如果细胞库存够多，不要花时间把细胞养好，解冻健康的 细胞比较好，但小弟已经试过三批细胞了，感觉情形都差不多 细胞不健康就不能继续做下去…囧 --

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