作者satan317 (傻达欧)
看板Biotech
标题[求救] 用flow测细胞存活率
时间Tue May 17 18:06:01 2016
最近才开始接触flow
想起问一些问题
1.
http://i.imgur.com/w1mYUpV.jpg
这是只有细胞，不经任何处理
像这样圈gate 只有圈到5% 算正常的吗?
或是我范围应该要圈大一点?
总觉得显微镜下观察的细胞数很多
结果跑flow 50000颗中只有2500颗是细胞这比例怪怪的
2.
http://i.imgur.com/VTHTy7u.jpg
这是上图gate中的细胞，FITC跟PI的结果
完全无处理，细胞存活率这麽低是正常的吗?
因为是还有要测其他膜蛋白
怕trypsin处理会有影响
所以细胞是用刮棒刮下来的
刮的过程有在冰上
如果不正常，想请问有甚麽可以改善的方法吗?
细胞是用LL2
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※ 编辑: satan317 (140.109.112.154), 05/17/2016 18:06:37
1F：推 conective: 试试看accutase打 看起来存活率只有50% 有点太低了 05/17 18:29
2F：→ conective: 你上普通PBS或是没有细胞的medium也会有左下角那群吗? 05/17 18:30
3F：推 maybereft: 可用Versene solution dissociation cells 05/17 20:31
4F：→ maybereft: dissociate 05/17 20:31
5F：→ satan317: 没试过纯pbs跟medium 05/18 01:12
6F：→ satan317: 不过我在想应该跟我medium和PBS也收集起来一起离有关 05/18 01:13
7F：推 dkal6: 只有50%是细胞很有可能是因为 A. debris B. false signal 05/18 09:51
8F：→ dkal6: triger by noise。假设你permilize的步骤问题不大，那应 05/18 09:51
9F：→ dkal6: 该就是在B的问题。因为你threshold数值设为1，因此一个细胞 05/18 09:51
10F：→ dkal6: 有可能会显示两个讯号，而比较强的讯号就是你的main popula 05/18 09:51
11F：→ dkal6: tion, 而比较弱的讯号就是出现在像是拖尾的地方。 05/18 09:51
12F：推 dkal6: 建议可以拉高threshold的值到50试试看，main population应 05/18 09:53
13F：→ dkal6: 该会变的更圆一些。 05/18 09:53
14F：→ lail: 你fsc-ssc图的scale bar是不是要用linear的？用log的会不会 05/18 12:12
15F：→ lail: 把细胞压缩了？ 05/18 12:12
16F：→ satan317: threshold是指电压吗? 05/18 13:20
17F：→ satan317: 刚有试着用linear 差别不大 05/18 13:23