作者FYT0429 (FTY429)
看板Biotech
标题[求救] 细胞核质蛋白分离定量
时间Wed Jun 1 13:52:35 2016
嗨大家好：
敝人正从事关於蛋白质从细胞膜转位到细胞核(nuclear translocation)的研究。
要观察这个蛋白质入核的现象，我目前采用两种实验方法：
1. 核质蛋白分离後，做Western blot
2. 萤光染色 (immunofluorescence)
想请问有没有其他建议的实验方法，也适用"观察蛋白质入核"这个现象？
感激不尽！
祝大家实验顺利。
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.4.190
※ 文章网址: https://webptt.com/cn.aspx?n=bbs/Biotech/M.1464760358.A.2D5.html
1F：→ a90648: 3目标蛋白接GFP做live image?06/01 15:17
2F：→ a90648: 多打了3...06/01 15:17
3F：→ hitmd: 同一楼，这方式最直接 06/01 17:46
4F：→ lail: 不过有的蛋白质接上萤光後行为会改变06/01 22:15
嗯嗯，做个fusion protein也没问题，只是之前跟教授提过，她觉得GFP这麽大颗，入核的?
※ 编辑: FYT0429 (1.171.57.236), 06/01/2016 23:46:12
5F：→ Ice9: 你查一小有关EGFR还是FGFR的文章，应该有参考价值。06/02 06:46
6F：→ Ice9: 另外有种作法，如果将已知的入核序列破坏，应该可以阻入核。06/02 06:48
7F：→ Ice9: 再则，如果条件合适，可以试试in vitro import assay。06/02 06:49
8F：→ Ice9: GFP 不太建议。若要做，可以考虑中间弄个「合适的」linker。06/02 06:51
感谢回覆。
我已经做了NLS mutated construct，GFP和invitro import assay我再看仔细一点：)
※ 编辑: FYT0429 (223.137.122.32), 06/02/2016 16:20:52
9F：→ Ice9: 对了，还要注意细胞是否会自然生成membrane或nuclear两种产 06/02 17:28
10F：→ Ice9: 物。观察手段方面，大概就你说的WB和IF两种了。 06/02 17:32
11F：→ Ianthegood: gfp进核是肯定没问题啊 06/04 02:29