作者eric0120000 (小e)
看板Biotech
标题[求救] 限制酶一起进TBE胶跑～Band会歪斜
时间Fri Jun 24 13:37:38 2016
抱歉！第一次在本版上发问有踩到雷，或有人问过先说声抱歉因为没搜到...
问题
http://i.imgur.com/cGvw23L.jpg
用0.5X TBE 2% agarose 100V直接跑含有限制酶截切过的PCR产物（没纯化.酵素还在里面）
结果发现看起来在primer dimers的地方好像都会有不明压力把band挤歪，详细如下：
（DNA＋2X Ampliquin Mix Red＋Primers＋水的产物直接用限制酶＋对应Buffer，作用
完後直接跑0.5X TBE 2%agarose 100V胶30min）
在确定不是胶没做好的前提下，发现不管跑几次都会像图片这样歪斜把ladder跟产物挤掉
像是以前跑的也会有同样情形
http://i.imgur.com/F26LP3J.jpg
应该也不是TBE容液没配好，请问有解吗？
不知道有没有漏讲什麽随时补充～感谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc), 来自: 140.112.60.5
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1F：→ blence: TBE不用1X却用2X的理由是？ 06/24 14:35
2F：推 leoblack: 歪斜通常是因为RE buf的盐影响,纯化过会改善 06/24 14:40
3F：→ eric0120000: 感谢！2X 说错是0.5xTBE、胶是2% 06/24 15:07
4F：→ Ianthegood: 你真的用2x tbe跑就不会被re的盐影响了 06/24 15:12
所以如果我提升TBE跑胶的倍数理论上盐类影响band歪斜可以获得改罗？我来试试
5F：→ yesno1011: 可以在产物里面加限制酶用的Buffer调整盐度 06/24 16:22
感谢！好～我来对看看原产物里面到底含有哪些盐类可以透过Re buffer来调整浓度～
※ 编辑: eric0120000 (140.112.60.5), 06/24/2016 16:34:24
6F：→ yesno1011: 讲错了QQ 是在没限制酶Buffer的部分加 (如Ladder 06/24 18:17
7F：→ yesno1011: 反正就是把所有泳道的盐度调到差不多就可以了 06/24 18:17
8F：→ eric0120000: 好唷！感谢大大们的帮忙 06/24 19:51
9F：→ xxtomnyxx: 该不会是 NEBuffer 吧 XD 06/24 20:07
10F：→ xxtomnyxx: 如果只是切 RE 确定 DNA 是正确的而不是要做 gelextrat 06/24 20:08
11F：→ xxtomnyxx: ion 的话，我都用总体积 5 uL 去切，之後用水稀释到 15 06/24 20:09
12F：→ xxtomnyxx: uL 才拿去跑胶，这样也是能改善。 06/24 20:09
13F：→ eric0120000: 有NEB也有CutSmart!感谢提供这方法我会试试看！ 06/25 00:02