作者chirpspeep (吱吱)
看板Biotech
标题[求救] 细胞长起来几天又莫名死掉
时间Wed Jul 13 17:34:26 2016
为了制作单株抗体，而在学校的某一栋系馆筛选出一批融合瘤细胞株
冻存在-80约一个月之後，利用乾冰带回自己的系馆。
在放进液态氮前，想说解冻确认一下存活率
但解冻细胞就一直失败
细胞刚解完看起来非常圆
隔天可以看到约有三成细胞贴附，其他细胞多半死亡
换掉medium之後，再隔天可以看到有贴的细胞都有分裂
就在有点放心的时候，隔天就会突然全部死光，毫无预警
因为这批细胞很重要，我们特地买cell banker冻存液，也利用渐冻盒
每管细胞量都至少有 2x10^6 cells/mL
解冻细胞是直接把冻管放到37度C水浴一分钟，补 medium 到 5mL
300g 离心 8 分钟，再用新的 medium 回溶，隔天也一定会换 medium
用同一罐 medium 养细胞的老师养的有活
培养箱里的其他细胞也都有活
就只有我的细胞没有活......
请问有人有发生类似的情况吗?
如果是一开始就冻坏，或是细胞在运输的过程中升温导致冰晶出现，
那细胞还会生长分裂吗？
总是先分裂一阵子，让我觉得没事之後马上死光光啊！！！！
还是有可能会是污染吗？
（但medium没有变色、混浊等现象，显微镜下看也没有不明物体)
拜托大家了
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1F：推 cyc5566: 不要换medium试试看，或直接问老师他的步骤 07/13 21:55
2F：→ chirpspeep: 老师用他的方式帮我做也解不开QQ 07/13 22:31
3F：推 osla30: 37度後直接加medium培养别离心，隔天再换medium？ 07/13 23:12
4F：→ audry729: 不要离心+1，因为解细胞要快才行 07/14 20:35
5F：→ Liat: 如果一定要离心，可考虑把medium增加到10ml再去离 07/15 00:17
6F：→ chirpspeep: 谢谢各位帮忙，但我没离心细胞还是出现一样情况QQ 07/19 14:19
7F：→ chirpspeep: 还是有活，但也是隔天马上死掉QQ 07/19 14:22
8F：推 qumai: 有听过hybridoma存的时候细胞数不能太高的说法 07/19 15:01
9F：→ qumai: 融合瘤不是浮游细胞吗@@ 我养都不会贴 07/19 15:04
10F：推 roc0860: 你的血清正常吗 07/24 20:27
11F：推 michealking: 不要离 解75T+10ML medium 07/31 21:50
12F：→ chirpspeep: 我最後不离心、试了三种medium终於养起来了谢谢大家！ 08/05 22:21
13F：→ chirpspeep: 不过我的融合瘤会贴耶，但pipet就能把细胞打起来 08/05 22:24