作者NCKUM (成功大学医学)
看板Biotech
标题[方法] starvation
时间Sun Jul 31 00:31:48 2016
我实验是为了看knockdown这gene A是不是不会帮助protein B释放出到medium
再利用ELISA测某个protein B
我之前有测过control和knockdown我的gene A
在starvation 24h下control测到我想看到的protein B比knockdown高
而在没starvation也是
但是control比knockdwon在starvation非常明显差异
而没starvation下只差异一点点
请问我现在要做protein B的signal
我要比较 control 比knockdown 下游signal 和 在kncokdown组加回protein B
也就是 control & knockdown & knockdown+protein B
我实验设计是 早上先种细胞 晚上starvation 隔天早上就直接加protein B不换medium
(因为换掉 他释放出来的protein B就被我换掉 还是再换一次新的serum-free medium?)
24小时候直接收lysis
还是有更好的方法
感谢
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※ 编辑: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 00:32:49
※ 编辑: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 08:19:36
1F：推 tynse71864: 我会直接加 换了会影响 07/31 18:48
2F：→ tynse71864: 但你的 protein B 要加进去的体积是？ 07/31 18:48
1ml 加8ul 在6-well
3F：→ tynse71864: 还有 B加进去的时间； 短时间的话冰的/有点大体积的 B 07/31 18:51
4F：→ tynse71864: 加进去会影响到其他的事情 07/31 18:51
抱歉 没说清楚 因为我看到在starvation时候 control 比knockdown组的function assay
和一些function protein很明显差异
在knockdwown这组 protein B 无法被释放出来
而在ELISA测到或许是protein B影响function, knockdwon geneA 无法释出protein B
所以就想在knockdown组加protein B 回来来对比knockdown alone组
想说在starvation环境下加回protein B (protein B加下去开始算24小时)
但是前天starvation时间在加protein B 不换medium 这样算好像超过24小时(还是没差?)
5F：→ Ice9: 隔天早上 [prot-B] 和外加了 prot-B 之後理论上的 [prot-B] 07/31 19:04
6F：→ Ice9: 会差很多吗？ 07/31 19:04
加protein B recombinant protein 一定会比自己释放出来的还强
※ 编辑: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 19:58:28
7F：→ blence: starvation目的是什麽?是除去血清或细胞周期或只是先前试 08/01 06:58
8F：→ blence: 出的最佳实验条件? 08/01 06:59
9F：→ blence: 另外,你的knockdown是上述什麽starved时间点前後做? 08/01 07:06
10F：→ blence: 以及不考虑加B那组,单纯有无kd会starved後多久看function? 08/01 07:07
11F：→ blence: 在不考虑上述问题时,我会在刚starved时就加protein B 08/01 07:09
12F：→ blence: 因为starvation会造或kd後极大差异,想加B就是restore目的 08/01 07:12
13F：→ blence: 这样,也没有加B前要不要更换medium的问题 08/01 07:15