作者a102740826 (Ling)
看板Biotech
标题[求救] 摇菌後抽plasmid
时间Wed Aug 3 23:22:48 2016
不知道各位有没有碰过像我一样的状况
之前有碰过盘子有长但菌摇不起来，LB是没问题的（可是明明就是用同一支抗生素，是因
为长一个colony比长一管容易？）
然後最近又碰到盘子长了，菌也摇起来了，但抽出来质体浓度和260/230都很低……
想知道这种现象代表什麽意思呢(>﹏<)?
By 做cloning做到崩溃的研究生
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1F：→ e104582001: SA污染08/03 23:26
2F：→ e104582001: 长的菌可能不是你原本的 E.colii08/03 23:26
刚好污染的菌抗抗生素这样吗@@?
3F：推 jsi: 之前遇到LB长不好时，尝试过两种做法：1.改用其他种的培养液08/03 23:37
4F：→ jsi: 2.先养在比一般培养时更少量的LB里，养起来後再transfer到较08/03 23:39
5F：→ jsi: 大量的LB继续养。此外，盘子较容易接触到空气，LB若没有摇晃08/03 23:40
6F：→ jsi: 就不易接触空气，或者摇晃程度刚好不适合菌生长，都可能影响08/03 23:42
嗯嗯！ 我有试过先摇小体积的方法，最近我们会移到共仪那边摇，看会不会是我们培养
箱转速或空气流动的问题
7F：推 tynse71864: 你摇菌的体积跟瓶子的大小各是? 看起来是生长得不好08/04 00:21
12cc养菌管，试过摇8cc和5cc
8F：→ blence: 你完全没提到这是一般的菌(plasmid)或有什麽特殊的部分08/04 00:25
不好意思没说清楚，这是我做cloning把我ligation的成品拿去transformation的菌～是
一般的DH5a
※ 编辑: a102740826 (111.248.119.192), 08/04/2016 01:25:44
9F：推 nellnell: 浓度低的话也可能是菌长不够 如果不是transformation08/04 01:47
10F：→ nellnell: 有问题 或许是菌加太少08/04 01:47
11F：推 nellnell: 12cc看起来是抽mini? 那菌液加多少？08/04 01:50
Protocol上建议1.5-7.0mL 我加7mL
12F：→ Ianthegood: 12cc的管超过3cc就太多了08/04 07:27
真的吗@@!!?? 那我下次可以改用锥形瓶摇
13F：推 LuciferC: 检查抗生素有没有问题，上个月大家都发生这样的状况，08/04 10:04
14F：→ LuciferC: 结果发现kantamycin跟ampicillin标反了08/04 10:04
我们也有怀疑过抗生素放太久，所以前阵子买了一罐新的。（话说标反也太…… 老板知
道应该会暴走XD?）
※ 编辑: a102740826 (140.112.59.208), 08/04/2016 16:52:42
15F：推 cothuho: 检查你的盘子是否放太久 是否平时放4度C? 有时侯是抗生 08/04 23:37
16F：→ cothuho: 素失效，你挑的都是杂菌。另外我通常早上十点前就挑clone 08/04 23:37
17F：→ cothuho: 放入5ml去摇37C 250rpm, 下午六点就不少了。5ml绝对不是 08/04 23:37
18F：→ cothuho: 问题。如果还是抓不出原因，全部重配一次。同时借别人的 08/04 23:37
19F：→ cothuho: 抗生素来一起试试，两间实验室同时发生问题的机率低。 08/04 23:37
20F：推 tynse71864: 12ml tube顶多2CC吧 至少留3X~4X体积的空气给菌生活 08/05 01:04
21F：推 nellnell: 我觉得摇菌不是问题耶 我5ml LB加5ml 菌一样摇的起来 08/05 01:45
22F：→ blence: 别乱教,摇菌基本原则只能用1/3-1/5的体积,加满是不对的 08/05 01:50
23F：→ blence: 原po还是没说用哪一类的plasmid,一般mini-prep效率是1ml 08/05 01:53
24F：→ blence: 可取得5-10ug了,扣掉暂留份,摇超过3ml完全不符合效益 08/05 01:56
25F：→ blence: 这类似问题的可能性有1.抗生素失效,像温度过高就已先加 08/05 02:08
26F：→ blence: 照光太久分解或plate久置失效等,致plate与摇菌的生长差异 08/05 02:11
27F：→ blence: 另外不熟悉无法区份satellite也算是 08/05 02:16
28F：→ blence: 2.越来越多特殊plasmid是不稳定,会自行重组,也会长不起来 08/05 02:17
29F：推 nellnell: 抱歉打错 是5ml LB+5ul的菌QQ 08/05 07:41
30F：推 mosu0714: 资讯要写详细点大家才能找问题啊~用什麽菌、摇多久 08/05 14:12
31F：→ mosu0714: 抗生素浓度多少、copy number、用甚麽方法抽等等XD 08/05 14:13
32F：→ mosu0714: 话说260/230比值问题应该只是抽的方法的问题吧 08/05 14:15
33F：→ mosu0714: 所以plasmid浓度太低搞不好也只是方法问题 08/05 14:15
34F：推 vivitune: 盘子很可能污染，重配先 08/06 01:39
35F：→ Ice9: 12ml养8ml，摇起来不会洒出来吗？而且一般都斜放吔？管子里 08/07 00:41
36F：→ Ice9: 面，就像B大说的，超过1/3就要考虑分管了。 08/07 00:42